1．依赖株检测法 FDC-P1细胞及32DCL-27细胞均为IL-3的依赖株。二者均培养于含5％WEHI-3细胞上清或5％ConA诱生脾细胞上清的10％NBS-IMDM培养液中。
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(1)先将FDC-P1细胞或32DCL-27细胞用Hanks液洗2次，再用10％NBS-IMDM调整细胞浓度为5X104／mL。
(2)取100ul IL-3待测上清加入96孔板中，可设一定的稀释度。最后加人上述细胞悬液100gL／孔，培养24h。
(3)力n／k．3H-TdR0．5／1Ci／20ul／孔，继续培养4—8h，收集细胞，测定cpm值。
(4)计算待测上清中IL-3活性单位时，有二种方法：①有已知活性单位的rlL-3时，可将rlL-3作系列稀释，得出达最大cpm值50％时的稀释度(设为m)，再得出待测上清cpm达rlL-3cpm值50％时的稀释度(设为n)。待测上清中IL-3的活性单位二m／nXrlL-3的活性单位；②无rlL-3时，可制定本实验室相对的IL-3活性单位。
2．组织胺测定法 本法是根据II_,-3能促使培养的小鼠脾细胞或骨髓细胞产生组织胺而设计的。
(1)取C57BL／6小鼠的骨髓细胞，用10％NBS-IMDM调整细胞至5X106／mL。
(2)取细胞悬液100ul加入已含有100ul待测上清的96孔板各孔内，同时设置标准品对照。于5％C02，37~C温箱中培养48h。
(3)取100ul无细胞上清，用荧光法检测其中组织胺含量。
3．骨髓干细胞增殖法
(1)无菌取C57BL／6小鼠或其他品系小鼠的双股骨、双胫骨骨髓细胞，用15％NBS—IMDM调整细胞至5X106／mL。
(2)取100~zLIL-3待测上清加人96孔板中，一般作1：4、1：8、1：16、1：32，4个稀释度，每个稀释度均设3个复孔。最后每孔加入100tzL上述细胞悬液，于5％C02，37~C温箱中孵育60～72h。
(3)加入0．5uCi／孔3H—TdR，继续孵育4—8h，收集细胞，测定cpm值。
4．集落刺激法
(1)取BDFl小鼠或其他品系小鼠骨髓细胞，用15％NBS-IMDM调整细胞浓度至104—105／mL。
(2)将3％琼脂糖置于100~C水浴加热溶化，待冷却至45~C时，取1份琼脂糖加入9份预温(37—40℃)的上述细胞悬液中
(3)于直径为35mm的小平皿中预先加入0．1mL倍比稀释的IL-3待测上清，每个稀释度各设3个复份，取上述琼脂糖细胞混合液0．9mL加入各小平皿中，置室温5～10rain，待琼脂糖凝固后，置37％，5％C02温箱中培养7do
(4)在倒置显微镜下计数集落形成数，以大于或等于40—50个细胞为一个集落。
(5)结果用集落刺激活性(colonystimulatingactivity，CSA)表示，CSA二集落数八05个单
个核细胞。
5．MIT法
(1)取C57BL／6小鼠或其他品系小鼠的骨髓细胞，Hanks液洗1次，调整细胞浓度至1．5X105／mL。
(2)取50ul IL-3待测样品加入96孔板中，设一系列稀释度，每个稀释度均设3复孔，同时设系列稀释的IL-3标准品对照，再加上述细胞悬液50ul，培养72h。
(3)每孔加10uL 5mg／mL的MIT，避光温育4h，用Hanks液洗细胞一次。
(4)每孔加100／~L盐酸异丙醇，37~C避光放置数分钟，待镜检孔中甲腊结晶全部溶解后，选择检测波长570nm，参考波长630nm测定OD值。
6．受体结合法(定量)
(1)将32DCL-27细胞或FDC-P1细胞用pH7．1的PBS洗2次，该缓冲液含有0．1％BSA和100t~s／mL的杆菌肽。用上述缓冲液调整细胞浓度为1X107／mL，台盼蓝染色检查细胞活性不低于98％。
(2)取细胞悬液0．1mL加于12X75mm的玻璃试管中，再加入0．1mL上述PBS或未标记的IL-3，最后加人0．5mL 50000～60 000cpm的“I-IL-3。37％水浴振摇温育2h。
(3)取上述两种反应混合物75ltl，分别加入含0．25mL二丁基邻苯二甲酸盐和1，2—二乙基邻苯二甲酸盐混合物(1．5：1)的Eppendorf管中，室温下离心30s。
(4)沉淀用缓冲液洗2次，卜计数仪测定cpm值。
(5)结果观察与判定：总结合量(TB)为不含未标记IL-3管的cpm值，非特异结合量(NB)为含未标记IL-3管的cpm值，IL-3特异结合量(SB)：m—NB，非特异结合量占总结合量的30％以下时，结果才有意义。
