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蛋白印迹法检测技术原理

时间:2012-02-23 00:21|来源:实验室前沿| 分享|点击:


蛋白印迹法检测技术(immunoblottingtest,IBT)亦称酶联免疫电转移印斑技术(enzyme linked immunoelectrotransfer blotting,EITB),因与Southern早先建立的检测核酸的印迹法——Southernblot(DNA印迹法)相类似,亦被称为Westernblot。

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    Western印迹法是将蛋白质借高分辨率的PAGE电泳有效分离成许多蛋白区带,分离后的蛋白带经电转移至一种固相支持体如硝酸纤维素膜(NC)膜上,然后以抗体为探针,与附着于固相支持体的靶蛋白所呈现的抗原表位发生特异性反应,结合于固相支持体的抗体可用多种2级免疫学试剂(如125I标记的A蛋白或抗免疫球蛋白,HRP或ALP耦联的A蛋白或抗免疫球蛋白等)检测。较常用的两种电转移法为:
 
    ①半干印迹,即凝胶与固相支持物夹在缓冲液浸湿的滤纸之间,然后通电10—30min;
 
    ②湿印迹,即凝胶与支持体夹心物浸入转移缓冲液中进行电转移,至少需45min以上。
Tags:原理,检测技术,法,印迹,蛋白,
责任编辑:何辉

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