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细胞表面蛋白的染色方法

时间:2012-03-05 01:02|来源:实验室前沿| 分享|点击:


免疫染色技术可对细胞表面多种蛋白进行检测,其固定步骤大致相同。为观察细胞表面抗原,需要改进的有两点:一是抗体结合的部位,二是怎样提高灵敏度。

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    这种改进的目的之一是防止细胞溶解,可以确保抗体不进入细胞内,因为细胞内存在未处理的抗原或潜在的交叉反应抗原。应用多聚甲醛固定,但不进行去污剂处理步骤。这样可保持细胞的完整性,使染色仅发生在细胞表面。这种方法适用于研究细胞表面表达量丰富的蛋白。
 
    但是,许多细胞表面抗原的浓度很低,甚至每个细胞仅有1000个抗原分子。因此有必要利用染色球体的光学性质进行观察。当检测表面抗原表达量低的贴壁细胞时,在任何一点观察到的抗原分子相对数量很低。解决这个问题的方法是使之在悬浮状态下观察。观察一个球形细胞的外周边缘,细胞表面的外周边缘实际上包含了很多层焦平面。因此,即使该抗原在细胞表面均匀分布,阳性细胞呈现出一染色环。而在细胞中心部位,只有一层抗原染色,而边缘由许多层组成,这均使染色的强度增加。
 
    贴壁细胞和悬浮细胞均可用上述方法观察。悬浮细胞按常规处理,贴壁细胞需要特殊处理,用胰蛋白酶或其他蛋白酶可能会破坏表面抗原,因此用EDTA或EGTA可使大部分细胞离散,从而像悬浮细胞一样进行染色。
Tags:方法,染色,蛋白,表面,细胞,
责任编辑:何辉

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