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抗髓磷脂相关糖蛋白自身抗体检测方法

时间:2010-10-08 04:23|来源:实验室前沿| 分享|点击:


目前尚无公认的标准化的测定方法,常用的有:

 
    (1)蛋白质印迹法:经SDS-PAGE分离牛或人CNS髓磷脂,将蛋白质转印至硝酸纤维素膜,而后与稀释的检测血清孵育,洗涤后加入辣根过氧化物酶标记的羊抗人IgM,经二氨联苯胺染色;或者依次加入一抗(兔抗人IgM),二抗(生物素标记的羊抗兔IgG),抗生物素—过氧化物酶复合物,经3—氨基—9—乙醇咔唑进行免疫显色。特异性IgM与位于90~100kD处的MAG相结合,反应为阳性。必须同时用已知IgM独特型M蛋白和抗MAG反应性的血清作对照。MAG的反应性总是与Po范围内相似反应活性的低分子量神经糖蛋白相关。对抗MAGIgM的半定量可通过倍比稀释受检血清来进行。
 
    (2)ELISA:采用该法可对抗MAG IgM的滴度进行半定量分析。假阳性结果不少见,可能由于抗体结合了抗原制品中的污染物或非特异结合了血清中浓度较低的低亲和力抗体,及忽略了阳性和阴性对照孔。这可能解释了为何一些只用ELISA的研究不能发现抗MAG的任何特异临床相关性,或异源性患者群中很少检测到抗MAG。要提高ELISA用于诊断抗MAG抗体相关综合征的特异性,可通过:①采用高纯度MAG以改进ELISA方法;②通过ELISA初步鉴定出血清中高滴度MAG抗体及与组蛋白H3的强交叉反应,由于在蛋白质印迹中不出现交叉,因此通过蛋白质印迹可鉴别抗MAG反应及与组蛋白H的交叉反应。ELSIA联合检测MAG和SGPG抗体的特异性也优于单独检测抗MAG抗体。
 
    (3)高效薄层色谱分析仪(HPTLC):HPTLC用于确定对PNS糖脂SGPG和(或)SGLPG的反应性,因为两者都具有MAG的抗原表位。含SGPG和SGLPG的酸性糖脂片段经HPTLC分离后点在膜上与患者血清和阳性对照血清反应,再经酶标二抗进行检测。
Tags:检测,方法,自身,蛋白,相关,MAG,反应,血清,抗体,Ig
责任编辑:何辉

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