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蛋白检测HA标记物

时间:2011-04-26 00:54|来源:实验室前沿| 分享|点击:


  HA标记物是流感病毒血凝素蛋白的一个表位。Niman(1983)用流感病毒HAl蛋白的75~110氨基酸残基的肽段免疫小鼠,获得特异性单抗,称为12CA5(当时称H26D08),其识别的(Wilson et a1.1984)合成肽表位序列为YPYDVPDYA。Field等(1988)将其作为表位标记物,用来标记酵母腺苷酸环化酶基因。构建时以序列GGP作为标记物的氨基末端和腺苷酸环化酶基因起始位点之间的连接肽。最终产生如下新的氨基末端序列连接到腺苷酸环化酶的起始甲硫氨酸上:NH2MYPYDVPDYASLGGPM。

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    Field等(1988)在酵母细胞中成功表达标记蛋白,并使用更短的肽段YPYDVPDYA,从12CA5抗体柱上洗脱纯化出有活性的酶,获得700倍的纯化物,回收率为40%,其洗脱需在30℃条件下进行15min。
 
    此后,亦成功地将HA标记物在氨基末端和羧基末端进行标记。使用12CA5固相抗体柱可分离获得具有DNA结合活性的纯化蛋白,且洗脱条件并非总是要求在30℃进行。HA标记物已用于细胞染色、免疫印迹、ELISA和免疫沉淀试验中的蛋白标记。其不足之处是抗—HA抗体在对哺乳动物细胞抽提物进行免疫印迹分析时,可与细胞多种蛋白发生交叉反应。
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责任编辑:何辉

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