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肿瘤坏死因子TNF的检测方法

时间:2011-02-01 00:33|来源:实验室前沿| 分享|点击:


     肿瘤坏死因子(tunlornecrosisfactor,TNF)有α和β两种类型,后者亦称淋巴毒素(lymphotoxin,LT),虽然产生的细胞类型不尽相同,但能与相同的受体结合,故二者的生物学活性极其相似;此外,二者又有膜结合型与分泌型两种形式。 copyright sysqy.com

 
    TNF-α与β在体内、外均可对一些肿瘤细胞或细胞系起杀伤作用,而对体外培养的多种正常细胞则无细胞毒效应。根据这一特点,可利用对TNF敏感的靶细胞测定TNF活性。最常用的方法是检测TNF对小鼠成纤维细胞株L929或L-M细胞的细胞毒活性,细胞死亡率与TNF活性成正比。并可用特异性中和抗体来区别TNF-α与TNF-β。检测细胞毒活性可用51Cr释放法或染料染色方法。
 
    利用抗原—抗体反应检测TNF,可采用RIA、ELISA、间接免疫荧光法及免疫组化法。RIA及ELISA可用于待检样品的精确定量,现已有国产的TNF ELISA试剂盒出售,方法简便、敏感且特异。而间接免疫荧光法及免疫组化法可用于对TNF的组织定位或观察TNF在细胞内及胞膜的定位。
 
    TNF-α分为跨膜型及分泌型,前者分子量为26kD,而后者则为17kD。可借助SDS-PAGE电泳,将蛋白按分子量大小分开,再用免疫印迹技术特异性地显示两种类型的TNF-a。
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责任编辑:何辉

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