抗双链DNA抗体常用的检测方法是IIF和ELISA,抗原基质为Hep-2细胞、短毛虫,大鼠肝冷冻切片或印片。IIF具有敏感性、特异性高的优势,可用于抗dsDNA的筛查试验。荧光图形为Hep-2细胞核浆均质性着染,有丝分裂细胞中染色质呈强均质型着染。肝细胞呈周边型核着染。短毛虫中动核强阳性均质性着染,核浆呈弱均质性着染。在操作过程中,应始终避免抗原基质干燥,否则局部盐浓度过高,将导致低亲和力抗体结合。在存在高滴度的抗组蛋白抗体或高脂血症时,用短毛虫检测时常有假阳性,为排除假阳性,建议在封片缓冲液中加溴乙淀,这样仅为阳性着染,而细胞和其他结构均为阴性。
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放射免疫测定时,选择DNA抗原很重要,必须是dsDNA,分子大小在105-107kD。噬菌体DNA(PM2)或质粒DNA(PUC9)较合适。ELISA必须将DNA包被到酶标板上。ssDNA容易被直接包被,dsDNA必须介质如多聚赖氨酸、鱼精氨酸或甲基化牛血清白蛋白才能包被。
不同的检测方法之间没有可比性,原因是:
①DNA抗原来源不同,可来源于真核细胞或原核细胞;可以是单链或双链DNA;DNA的形态可以是分散或匀质型。
②抗原的状态不同—在放射免疫测定时,DNA抗原溶于溶液中;在ELISA中,DNA是固相形式;在以短毛虫为基质的IIF中,DNA抗原位于细胞核内。
③反应条件不同。
④不同方法的敏感性不同。
⑤抗体的亲和力不同。