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用氯化铯离心法纯化噬菌体

时间:2010-10-12 02:14|来源:实验室前沿| 分享|点击:


需要的器材和试剂

L8—M Beckman超速离心机或与其相当的机型
吊桶式SWTi4l转头或相当类型
氯化铯(Sigma)
PBS
纯化的噬菌体样本
 
使用方法
1.在每毫升最后的噬菌体悬液(例如来自实验方案13.11)中,加入0.45 g氯化铯,充分混匀至溶解。
2.用吊桶式转头  (或与其相当的型号)  离心溶液,15℃17h,噬菌体将浓缩在组分1和组分2中(。组分1的浓度较高,但组分2的体积较大。用巴氏滴管或塑料注射器吸取这些组分。如果是第一次使用本实验方案,那么先收集所有条带并分别对其检测将是明智之举。
3.将收获的溶液对PBS透析过夜。
4.通过感染大肠杆菌DH5cF,或TGl滴定各个不同组分中噬菌体,并保存滴度最高的组分。通常,噬菌体会集中在1个区带内,而较少的数量会分散在其他区带(如果可见)。加入甘油至10%;按每份样本1013个噬菌体等量分装并储存于-80℃。更进一步的质量控制则可进行蛋白杂交印迹,采用抗标签抗体或抗pⅢ抗体。
Tags:,相当,
责任编辑:何辉

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