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蛋白质从凝胶转印至膜

时间:2009-11-26 06:59|来源:实验室前沿| 分享|点击:


有多种方法可将凝胶中的蛋白质转印至膜上对抗原进行检测。最早的方法是简单扩散(Renart等1979;Bowen等1980)。后来使用了真空助溶液流(vacuum-assistedsol—ventflow,Peferoen等1982)和电洗脱(Towbin等1979;Bittner等1980;Reiser和Wardalel981;Kyhse-Andersenl984)。现在电洗脱或电印迹已成为标准方法。其主要优点是转印速度快、完全。电洗脱有两种方法:一种是湿转印法,即将凝胶—膜夹层组合完全浸入转印缓冲液中;另一种是半干转印法,即将凝胶—膜夹层组合放在浸有转印缓冲液的吸水纸之间。前者是将夹层组合放入有铂丝电极的缓冲液槽中。而后者是将凝胶—膜夹层组合置于2个平板电极之间。这两种转印的装置已有商品出售,效果均较好,但不同的实验室偏爱其中一种。

本文来自实验室前沿

 
    其他几种膜载体也可用于免疫印迹。其中以硝酸纤维素膜最为常用,也是多数情况下首选的膜。另外2种较常用的膜载体是带正电荷的尼龙和化学活化的滤纸,前者更常用。
 
    尼龙本身只能结合少量的蛋白质。因此,多数情况下不太适用。但是,它的机械强度好,在清洗或干燥时不易发生变形。带正电荷的尼龙(PVDF;Immobilon)可结合各种蛋白质,使用方式类似于硝酸纤维素膜,由于活化的尼龙膜上有大量的蛋白质结合位点,所以背景较差,但小心封闭剩余的结合位点可解决背景问题。PVDF膜在制备多肽供蛋白质化学分析中最为常用。在进行蛋白水解和序列分析时,通常是先将蛋白质结合在PVDF膜上。
 
    偶尔使用的膜还有重氮化滤纸。此种活化的滤纸现有商品出售,它能与蛋白质共价结合,也具有良好的机械强度,遗憾的是其偶联方法与许多凝胶电泳系统不相容。由于它是通过伯氨基连接的,所以凡是使用不含游离氨基的凝胶缓冲液的系统需要用该滤纸(其他方法电泳缓冲液,见Jovin等1970)。这种滤纸较贵,且一旦活化后反应基团的半衰期较短。使用方法可参照厂家的说明书。
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