蛋白质在细菌中表现后，以反复的冷冻-解冻方法打破细胞，再用硫酸铵把蛋白质沉淀下來，此步骤可以去除大部份核酸、多醣、脂质等杂物。 实验室前沿，了解实验室动态
仪器用具：恒温震荡培养箱37℃；高速冷冻离心机及离心管 (使用20,000 rpm离心陀)使用高速离心机要注意： 离心机及离心陀的温度要预冷完全，相对位置的两只离心管要平衡好，离心陀转速绝对不能超过最高速限；液态氮及冰筒；37℃温水浴
药品试剂：转型菌株pQG11/M15 [pREP] 单一菌落；LB/amp/kan 及IPTG (1 M stock)；Lysis buffer (50 mM Na3PO4·12H2O, pH 7.0; 0.1 M NaCl; 0.1 mM EDTA; 0.2%Triton X-100)使用前添加成10 mM β-mercaptoethanol, 25 μg/mL PMSF, 40 μg/mL lysozyme。Buffer A-0 (50 mM Na3PO4, pH 7.0) 使用前每1 L 添加70 μL β-mercaptoethanol 成为10 mM 最终浓度。Buffer A-150: Buffer A-0 再加有0.15 M NaCl；硫酸铵 (要烘干并以研砵磨碎)
方法步骤：
1) 挑取培养皿上单一菌落，培养在15 mL 的LB/amp/kan 液体培养基中，以120rpm 转速震荡，在37℃下培养过夜。
2) 取上述菌液6 mL加入300 mL新鲜LB/amp/kan培养基中，以120 rpm 37℃培养至A600 = 0.6 后，加入IPTG成为1 mM浓度，继续以120 rpm在37℃震荡培养4 h。
3) 将菌液倒入50 mL 离心管 (conical tube) 中离心10 min (5,000 rpm)。
4) 倒去上清，可将菌块连同离心管置 -20℃冰箱贮存。
5) 取出含菌块的离心管置碎冰上，待菌块溶解后，以残存液体均匀悬浊的。再
加入10 mL lysis buffer 轻轻悬浮的。
6) 将菌液放在液态氮中冷冻1 min，然后在37℃水浴中摇荡溶解的。如此反复三次，尽量不要产生大量气泡。将离心管的内容物倒入50 mL 高速离心机的离心管内。
7) 离心20 min (12,000 rpm, 4℃) 取上清共 _____ mL，称为 粗抽取液 (XT)；预留100 μL 以便日后一起进行分析。此后样本均得放置碎冰上，以低温进行实验。
8) 此上清加入5 mL buffer A-0 混匀后倒入烧杯，置碎冰上放冷，不时搅拌并缓缓加入固体硫酸铵 _____ gm，使成为70%饱和度，加完后再搅拌10 min。
9) 离心20 min (12,000 rpm, 4℃) 后小心倒去上清，取白色沉淀部份。
10) 沉淀加以2 mL buffer A-150 均匀悬浊的，再以桌上型离心机去除不溶物质，(10,000 rpm, 5 min)，共得 ______ mL，称为 全蛋白质 (TP)；预留100 μL，连同上述XT 置4℃冷藏。
11) 其余溶液部份准备进行胶体过滤层析，标示清楚后置4℃冷藏。
