1．1恒温培养箱：36±1℃
1．2恒温水浴箱：45±1℃
1．3高压灭菌锅
1．4均质器
1．5试管:18×150mm 18×180mm
1．6锥形瓶:500ml 250ml
1．7平皿：直径为90mm
1．8灭菌吸管
1．9灭菌均质杯
1．10酒精棉
1．11天平:感量0.1g
1．12冰箱：0-4℃和-15～-20℃
2．培养基的制备
2.1生理盐水
称氯化钠8.5g溶于1000.0ml蒸馏水中，分装锥形瓶和18×150mm试管内，每管吸9ml,121℃高压灭菌15min。
2.2胰蛋白胨大豆肉汤
称大豆肉汤30g和氯化钠95g溶于1000.0ml蒸馏水中，加热煮沸充分溶解，分装18×180mm试管内，每管吸10ml,121℃高压灭菌15min。
2.3Baird-parker培养基
称6.3g溶于95ml蒸馏水中，加热煮沸充分溶解，分装锥形瓶内，121℃高压灭菌15min。冷却至50℃，加入1瓶亚碲酸钾卵黄增菌液（冻干粉加5ml无菌生理盐水溶解）混匀。倾注平板备用，待平板凝固后放入冰箱0-4℃。
2.4普通肉汤培养基
称18g溶于1000.0ml蒸馏水中，加热煮沸充分溶解，分装18×180mm试管，每管吸10ml，121℃高压灭菌15min。
2.5冻干血浆（凝固酶试验）
每支安瓶中加入0.5ml灭菌生理盐水至完全溶解，然后加入0.3ml待检液，于37℃6 h培养，观察判定结果。
3.操作步骤
3.1样品的稀释和培养
|
以无菌操作取25g样品
|
|
放入装有225ml生理盐水的无菌均质杯内，
|
|
均质1分30秒，制成1：10的样品匀液
|
copyright sysqy.com
|
先放入9ml生理盐水中，摇匀
|
|
前3支大豆肉汤分别吸1ml均质好的样液
|
|
作为十倍的连续稀释度的样品稀释液
|
|
|
|
从9ml生理盐水中吸取1ml稀释液，
|
|
先注入另一支9ml生理盐水中摇匀
|
|
接着吸取1ml样品稀释液
|
|
分别注入中间3支大豆肉汤中，
|
sysqy.com
|
作为百倍的连续稀释度的稀释液
|
|
再从9ml生理盐水中吸取1ml稀释液
|
|
分别注入后三支大豆肉汤中
|
|
作为千倍的连续稀释度的稀释液
|
|
放入36±1℃培养箱培养48±2h
|
|
从各管接1环划线于Baird-parker平板
|
|
放入36±1℃培养箱培养48±2h
|
|
再从每一平板上挑取1个可疑菌落
|
实验室前沿，了解实验室动态
|
移种到肉汤培养基中，36℃培养24h
|
|
取肉汤培养物0.3ml和0.5ml凝固酶试验
|
|
于灭菌试管内充分混合，36℃培养
|
|
观察6h是否有凝块，完全凝固为阳性
|
sysqy.com
实验室前沿，了解实验室动态
备注：金黄色葡萄球菌的单个菌落在Baird-Parker琼脂平板上呈圆形，表面光滑、凸起、湿润，直径2～3mm。灰黑色至黑色，有光泽，常有浅色（非白色）的边缘，周围饶以不透明圈（沉淀），其外常有一清晰带。当用接种针触及菌落时具有黄油样粘稠感。有时可见到不分解脂肪的菌株，除没有不透明圈和清晰带外，其他外观基本相同，从长期贮存的冷冻或脱水食品中分离的菌落，其黑色常较典型菌落浅些，且外观可能较粗糙，质地较干燥。
3.2报告结果
查MPN表，报告金黄色葡萄球菌MPN/g。
