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免疫组化控制方法及非特异性染色

时间:2011-07-01 02:03|来源:实验室前沿| 分享|点击:


一、非特异性染色的识别

常出现在组织边缘、胶原纤维及血浆渗出处,坏死组织及固定不良的组织中心处。表现为弥漫性,均匀性的背景染色。也可以是随机分布的阳性反应产物点、团或块状。 内容来自实验室前沿网站

二、非特异性染色的原因 内容来自实验室前沿网站

1. Ig与Fc受体结合 实验室前沿,了解实验室动态

多见于冰冻切片(特别是淋巴造血组织,淋巴细胞,单核细胞,组织细胞表面多),主要是和二抗反应,因为一抗一般稀释度均较大,因此Fc受体的干扰基本不存在。由于福尔马林固定破坏了大部分的Fc受体,所以石蜡切片不多见。 sysqy.com

避免方法

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(1)用以二抗相同种族的正常血清封闭切片; 实验室前沿,了解实验室动态

(2)用不含Fc段的抗体,但价格贵。(V区,C1区不含Fc段,用Pepsin消化) copyright sysqy.com

2. 静电吸附

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抗体是一种带负电荷的球蛋白,容易和带正电荷的组织相结合,如胶原纤维。 内容来自实验室前沿网站

避免方法

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(1)尽量稀释一抗;

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(2)降低抗体的电荷,如用2.5%NaCl,0.05mTBS代替PBS; copyright sysqy.com

(3)用去垢剂如triton-100,Tween-20等处理切片。 本文来自实验室前沿

3. 二抗与组织中的Ig结合

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如羊抗兔的二抗,二抗可以标本中(人)Ig发生交叉反应,科学上越接近的动物,交叉反应越明显,如人与猴,兔与豚鼠。

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避免方法:用与待测组织相同的5%的正常血清稀释二抗。如人血清。

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4. 组织中残存醛基与Ig的结合 本文来自实验室前沿

如醛类固定后未能彻底的冲洗,残留醛基可以和Ig结合。

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避免方法

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(1)彻底冲洗;

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(2)0.02%的新鲜的硼氧化钾液处理10分钟后冲洗。 copyright sysqy.com

5. 内源性过氧化物酶 内容来自实验室前沿网站

红细胞,粒细胞的含量尤其高,镜下可以识别,不要将其当成阳性结果。 实验室前沿,了解实验室动态

避免方法

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(1)石蜡切片 0.3%双氧水-甲醇溶液处理切片; 内容来自实验室前沿网站

(2)冰冻切片 3%双氧水处理切片5分钟(99:1)因为未经固定包埋,大部分酶未被破坏; 内容来自实验室前沿网站

(3)对于骨髓涂片 最好用非过氧化物酶标记的抗体

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6. 内源性生物素

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以 24mg/ml的卵白素封片15分钟。 内容来自实验室前沿网站

7. 交叉反应 copyright sysqy.com

PcAb敏感性高,但特异性稍低,容易出现非特异性染色。 本文来自实验室前沿

避免方法实验室前沿,了解实验室动态

(1)尽可能稀释抗体; 实验室前沿,了解实验室动态

(2)尽可能用McAb。

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Tags:方法,控制,免疫,组织,避免,反应,Ig,抗体,Fc,结合,
责任编辑:何辉

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