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什么是免疫组化(IHC)

时间:2010-06-23 14:37|来源:实验室前沿| | 分享|点击:


免疫组化是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及定量的研究,称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)(简称IHC)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。 内容来自dedecms

免疫组化实验所用的组织和细胞标本 织梦好,好织梦

  实验所用主要为组织标本和细胞标本两大类,前者包括石蜡切片(病理切片和组织芯片)和冰冻切片,后者包括组织印片、细胞爬片和细胞涂片。

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  其中石蜡切片是制作组织标本最常用、最基本的方法,对于组织形态保存好,且能作连续切片,有利于各种染色对照观察;还能长期存档,供回顾性研究;石蜡切片制作过程对组织内抗原暴露有一定的影响,但可进行抗原修复,是免疫组化中首选的组织标本制作方法。

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免疫组化实验所用的抗体

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  免疫组化实验中常用的抗体为单克隆抗体和多克隆抗体。单克隆抗体是一个B淋巴细胞克隆分泌的抗体,应用细胞融合杂交瘤技术免疫动物制备。多克隆抗体是将纯化后的抗原直接免疫动物后,从动物血中所获得的免疫血清,是多个B淋巴细胞克隆所产生的抗体混合物。 内容来自dedecms

 

  免疫组化常用的染色方法

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  根据标记物的不同分为免疫荧光法,免疫酶标法,亲和组织化学法,后者是以一种物质对某种组织成分具有高度亲合力为基础的检测方法。这种方法敏感性更高,有利于微量抗原(抗体)在细胞或亚细胞水平的定位,其中生物素—抗生物素染色法最常用。

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免疫组化操作步骤 dedecms.com

  一 免疫组化( LP 法)操作步骤 :

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  1. 切片常规脱蜡至水。如需抗原修复,可在此步后进行

本文来自织梦

 

  2. 缓冲液洗 3min/2 次。 dedecms.com

 

  3. 为了降低内源性过氧化物酶造成的非特异性背景染色 , 将切片放在 Hydrogen Peroxide Block 中孵育 10-15 分钟。

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  4. 缓冲液洗 5min/2 次。 织梦好,好织梦

 

  5. 滴加 Ultra V Block , 在室温下孵育 5 分钟以封闭非特异性的背景染色。

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  (注:孵育不要超过 10 分钟,否则会导致特异性染色降低。如果一抗的稀释液中含有 5 - 10% 正常羊血清,这一步可以省略。) 内容来自dedecms

 

  6. 缓冲液洗 5min/2 次。

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  7. 滴加一抗工作液 37 ℃孵育 1 - 2 小时。(具体孵育时间和温度由试验者最终决定)

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  8. 缓冲液洗 5min/2 次。 本文来自织梦

 

  9 . 滴加 Primary Antibody Enhancer( 增强子 ) , 在室温下孵育 20 分钟。

织梦内容管理系统

 

  10 .缓冲液洗 5min/2 次。

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  11 .滴加 HRP Polymer( 酶标二抗 ) ,在室温下孵育 30 分钟。

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  (注: HRP Polymer 对光敏感,应避免不必要的光暴露并储存在不透明的小瓶中。) 织梦内容管理系统

 

  12 .缓冲液洗 5min/2 次。

织梦好,好织梦

 

  13 .向 1ml DAB Plus Substrate ( 或 AEC Plus Substrate) 中滴加 1-2 滴 DAB Plus Chromogen (或 AEC Plus Chromogen ) , 混匀后滴加到切片上,孵育 3 - 15 分钟。(具体时间由染色深浅决定。) copyright dedecms

 

  14 .自来水充分冲洗 , 复染,脱水 , 透明 , 封片。

Tags:免疫组化,概念,为什么要做
责任编辑:何辉

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