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免疫金银染色(IGSS)操作流程

时间:2010-12-17 01:17|来源:实验室前沿| | 分享|点击:


石蜡切片IGSS

    (1)切片脱蜡至水。
    (2)0.1%胰蛋白酶37℃消化20min或抗原修复20min(98℃),自然冷却至室温。
    (3)0.05mol/L(pH7.4)TBS洗3×3min。
    (4)l%EA(卵蛋白)15min,不洗。
    (5)适当稀释的特异抗体室温4h或4℃孵育20h,或37℃孵育1h。
    (6)0.05m01/L(pH7.4)TBS洗3×5min。
    (7)0.02m01/L(pH7.4)TBS(内含0.1%BSA)洗10min。
    (8)1%EA 15min,不洗,1:10~1:20稀释的PAGlonm室温孵育1h,或37℃孵育30min。
    (9)0.05mol/L(pH7.4)TBS洗10min。
    (10)1%戊二醛洗10min。
    (11)双蒸水洗5min。
    (12)1%明胶洗5min。
    (13)银避光显影8~15min。
    (14)双蒸水洗15min。
    (15)固定:用显影定影液(1:4或1:10)固定5min,也可以用15%硫酸钠-20%硫代硫酸钠混合液固定1~3min,或用1%戊二醛固定5min,50℃温水洗3~6min。
    (16)衬染,核固红衬染3min或甲基绿衬染3min。
    (17)常规脱水,二甲苯透明,常规树胶封片。
    (18)镜检:阳性物质呈黑色或黑褐色,颗粒分布于抗原—抗体反应部位;背景较干净,呈红色。
 
   胃未分化癌IGSS-P53              HCC IGSS-HBsAg
核内内呈黑色阳性表达,背景为红色,×400    细胞浆内呈黑色阳性,×200
 
冰冻切片IGSS
    做冰冻切片的组织可先经过固定再作切片,也可先制作冰冻切片,然后再固定。这要根据保存抗原的需要而定,固定过的组织可用含20%蔗糖的PBS(0.1mol/L,pH7.4)浸泡过夜,使切片减少冰结晶,保持组织细胞良好的形态结构。切片人0.05mol/L(pH7.4)TBS洗3×3min,染色步骤同石蜡切片。
Tags:操作,流程,金银,免疫,
责任编辑:何辉

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