实验室前沿——做中国最专业实验室前沿资讯网

现在的位置:主页 > 实验技术 > 医学实验室 > 病理室 >

免疫组化(IHC)抗原修复必须注意的问题

时间:2012-03-08 00:29|来源:实验室前沿| | 分享|点击:


1.PH值的应用范围及选择。

copyright dedecms

应用于抗原修复的物质很多,但至今为止,大家公认的最好的抗原修复液还是柠檬酸盐缓冲液PH6.0,据多年来的实践认为,该液确实很好,它适合于大多数的抗原,在常规应用的临床标记抗体中基本都适用,经用该液修复后的抗原表达增强,抗原的定性和定位很理想,结果不错。但近来也有文献报道,应用抗原修复液PH8.0的效果也不错。 dedecms.com

2.抗原修复时应选择最佳温度。 内容来自dedecms

据Masson等研究表明:70℃-90℃的温度对没有经固定的蛋白可发生变性,但经福尔马林固定的蛋白,要使其发生变性,温度必须在92℃↑。据实验认为温度在92℃-98℃是合适的,尤其在95℃为最好,这是因为:①这种温度未达沸腾,切片不容易脱离裁片;②能够解离和破坏与蛋白交联的甲醛醛键等,处理时可以随意选择和确定抗原修复的作用时间。

内容来自dedecms

3.抗原修复时有效温度所需持续时间根据各单位的设备条件以及使用的仪器不同,抗原修复时在有效的温度范围内所持续的时间也不一样。

织梦内容管理系统

例如:真空负压抗原修复法,当达到预定的温度和所需的负压(66.7KPa)后可持续5-10分钟,微波辐射抗原修复法温度不好控制,抗原修复液容易沸腾,如果切片附贴任凭其沸腾持续5-10分钟。如果切片附贴很牢固,为了防止脱片,一发现抗原液已沸腾,即可关掉电源,待温度下降后,又可重开电源。如此反复数次,使之持续10分钟。不过似这种停停开开着的做法效果不如开着的,因为开着的除了热效应以外,还有足量的微波辐射。应用高压抗原修复法,当发现抗原修复液沸腾后,加上压力阀,出现喷气后,可持续时间达2-4分钟。隔水热加热抗原修复法,要特别注意内外液体的温度,内液指抗原修复液,外指浸泡抗原修复液容器的水,应用时用温度计浸入抗原修复液测试,使之保持在有效的温度(92℃↑)范围内。持续时间在40分钟,电炉加热抗原修复法,其持续时间在10分钟以上。由于效果较差,该法目前较少使用。

内容来自dedecms

4.抗原修复液必须遵循自然降温规律,否则效果不好或达不到抗原修复的目的。 织梦内容管理系统

抗原修复持续时间过后,取出放于室温中让其慢慢地降温,决不能为了争取时间,强行用冰块或冷水令其降温。这是因为当高温中的抗原蛋白分子链脱离了其它的束缚或联结,要有一个自然环境让其自然放松下来,随着温度的降低,它们会慢慢地恢复原来的形态和构型。如果用冰块和冷水强行令其降温,松开后的蛋白分子肽链突遇降温而固定下来,恢复不了原有的构型,达不到预想的效果。 copyright dedecms

5.尽量使用足量的抗原修复液。

织梦好,好织梦

抗原修复的方法,都采用加热的方法,尤其是微波辐射加热法,该法由于产热快。液体容易挥发直至干涸。因此,应用于抗原修复的液体,一定要充足,防止切片干涸。用于抗原修复的切片,如果由于液体少而导致切片的干涸,则应丢弃切片,因为热干涸的切片中的抗原是没办法补救的,因它是一种不可逆的现象。据实验认为,用于微波辐射抗原修复的液体,量大可多至1000ml。应用大量的抗原修复液时,由于它的量较大,可延缓了液体的沸腾时间,增加了切片受微波辐射的量,对抗原修复将达到彻底。

内容来自dedecms

6.切片必须附贴牢固。

织梦好,好织梦

用于抗原修复的切片,必须附贴牢固,否则发生掉片,则前功尽弃。 织梦好,好织梦

Tags:必须,注意,问题,修复,抗原,组化,IHC,免疫,
责任编辑:何辉

最新更新

点击排行

更多阅读者

其他人正在阅读