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组织蛋白A—金(PAG)放大法

时间:2010-09-14 02:49|来源:实验室前沿| 分享|点击:


为了得到更明确的染色结果,在用IGS方法定位细胞抗原时可采用搭桥法,使IGS得到放大,这里介绍一种用抗A蛋白抗体作桥的PAG放大法。由于抗蛋白A抗体既能通过Fab段又能通过Fc段与PAG上的蛋白A结合,因此与其他桥抗体相比,它能够在抗原位点处聚集更多的胶体金颗粒,下面以5羟色胺定位为例说明这一新方法。

本文来自实验室前沿

    (1)石蜡切片一脱蜡至水。
    (2)1%胰蛋白酶消化10rain或3mol/L尿素消化30min。
    (3)0.05mol/L TBS(pH7.4)振洗5rainX2次。
    (4)1%EA封闭组织10min。
    (5)用0.05mol/L TBS(pH7.4)稀释兔抗5羟色胺抗体(1:1 000)4℃过夜,或者37℃1h。
    (6)0.05mol/L TBS(pH7.4)振洗5rainX2次。
    (7)1%EA封闭10min。
    (8)用0.05mo!/L TBS(pH7.4)稀释PAG(1:40),37‘C 1h。
    (9)0。05mol/L TBS(pH7.4)振洗10minX2次。
    (10)1%EA封闭10min。
    (11)抗A蛋白抗体(145min。
    (12)0.05mol/l TBS(pH7.4)振洗10minX2次。
    (13)加0.05mol/L TBS(pH7.4)稀释PAG(1:40),37’C 45min。
    (14)0.05mol/l TBS(pH7.4)振洗10minX2次。
    (15)蒸馏水振洗5min。
    (16)1%戊二醛作用10min。
    (17)蒸馏水振洗5min。
    (18)0.01%伊文思蓝染色2min,甘油封片。
 
    光学显微镜下观察,小肠黏膜内含有嗜银颗粒的细胞胞浆呈红色,阳性颗粒位于细胞核底部,比单纯用PAG染色深度得到加深,阳性结果得到放大。由于抗A蛋白抗体既能通过Fab段又能够通过Fc段与PAG上的A蛋白结合,因此,与其他桥抗体相比它能够在抗原位点处聚集更多的胶体金颗粒。基本原理如图。
    PAG放大法的优点:①使用试剂单一;②大大提高IGS的敏感性,使应用IGS方法定位抗原时,可使用高稀释度的抗体;③背景干净。
PAG放大法原理
Tags:大法,蛋白,组织,
责任编辑:何辉

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