Fas（CD95/APO-1）分子已被证实是一种细胞表面的受体，可与Fas配体（FasL）结合，介导细胞凋亡。本法利用抗－Fas－生物素通过蛋白印迹法、流式细胞分析或免疫组化染色检测Fas/Apo-1分子。 本文来自实验室前沿
【样本来源】
(1) 单层粘附细胞；
(2) 细胞悬液；
(3) 组织切片细胞提取物。
【材料与试剂】（Roche公司试剂盒）
(1) 鼠抗人－Fas-Biotin；
(2) 封闭缓冲液： 0.1mol/L Tris-HCL， 0.1% BSA（w/v）， 0.1% Tween 20（v/v）
(3) POD封闭液：含0.3% H2O2的甲醇液；
(4) 链霉亲和素－POD（10mg/ml）
(5) 链霉亲和素－荧光素（10mg/ml）
(6) DAB底物
【操作方法】
1、蛋白印迹法（western blotting）
(1) 准备标本，并经SDS－PAGE分离；
(2) 将所分离的蛋白转移至PVDF或NC膜；
(3) 用封闭缓冲液封闭非特异性结合位点，室温1小时，轻柔振摇；
(4) 用抗－Fas-Biotin（1mg/ml）在含1％BSA的PBS液中室温孵育1小时，轻柔振摇；
(5) TBST室温洗膜2次，每次10min；
(6) 在链霉亲和素－偶联物即链霉亲和素－POD中孵育；
(7) 在大容量的TBST中洗膜4次，每次15min；
(8) 在DAB中室温孵育5～15min；
(9) 观察结果。
2、流式细胞分析法
（1） 以PBS洗细胞（单层细胞或细胞悬液）；
（2） 在抗－Fas-Biotin（1:20稀释）中孵育细胞；
（3） PBS中洗细胞2次；
（4） 于链霉亲和素－荧光素溶液（10mg/ml）中室温孵育30分钟；
（5） PBS中洗细胞2次；
（6） 在荧光显微镜下观察结果或用PBS稀释细胞后进行流式细胞分析。
3、免疫组化法
（1） 已固定的组织或组织切片于APES－包被的玻片上，37℃干燥过夜；
（2） 将已干燥的切片置于混合二甲苯（xylol）中脱蜡，以梯度乙醇脱水；
（3） 将切片置于柠檬酸缓冲液以最高强度微波处理5x5分钟，冷却至室温；
（4） 将玻片浸入PBS，用PBSA（PBS＋BSA）封闭，室温20分钟；
（5） 如需要，在POD封闭液中封闭内源性POD，室温作用30分钟；
（6） 加入抗－Fas-Biotin溶液（1:20至1：100稀释），37℃孵育30分钟，
（7） PBSA洗玻片三次或浸泡洗涤；
（8） 于链霉亲和素－POD溶液中室温孵育30分钟；
（9） PBS中洗玻片三次
（10） DAB底物反应液中孵育直至呈现清晰可见的颜色；
（11） 苏木素（hemalum）复染，封片，观察结果。
【结果判断】
蛋白印迹法：含有Fas抗原的膜成分呈现棕色条带。
