二．免疫组化 ( 三步法 ) 操作步骤 ： 内容来自实验室前沿网站
（ 1 ）、石蜡切片脱蜡至水。 本文来自实验室前沿
（ 2 ）、 3%H 2 O 2 室温孵育 5-10 分钟，以消除内源性过氧化物酶的活性。
（ 3 ）、蒸馏水冲洗， PBS 浸泡 5 分钟 x2 （如需抗原修复，可在此步后进行）。 sysqy.com
（ 4 ）、 5-10% 正常山羊血清（ PBS 稀释）封闭，室温孵育 10 分钟，倾去血清，勿洗。滴加 一抗 工作液， 37 ℃ 孵育 1-2 小时或 4 ℃ 过夜。 sysqy.com
（ 5 ）、 PBS 冲洗， 5 分钟 x3 次。 sysqy.com
（ 6 ）、滴加适量 生物素标记二抗 工作液， 37 ℃ 孵育 10-30 分钟。 本文来自实验室前沿
（ 7 ）、 PBS 冲洗， 5 分钟 x3 次。
（ 8 ）、滴加适量的 辣根酶或碱性磷酸酶标记的链霉卵白素 工作液， 37 ℃ 孵育 10-30 分钟。 内容来自实验室前沿网站
（ 9 ）、 PBS 冲洗， 5 分钟 x3 次。
（ 10 ）、显色剂显色 3-15 分钟（ DAB 或 NBT/BCIP ）
（ 11 ）、自来水充分冲洗，复染，脱水，透明，封片。
三. 冰冻切片免疫组化染色步骤：
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冰冻切片 4-8um ，室温放置 30 分钟后，入 4 ℃丙酮固定 10分钟，PBS洗，5分钟x3，用过氧化氢孵育5-10分钟，消除内源性过氧化物酶的活性。
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近年来，随着免疫组织化学技术的发展和各种特异性抗体的出现，使许多疑难肿瘤得到了明确诊断。在常规肿瘤病理诊断中，5%-10%的病例单靠H.E.染色难以作出明确的形态学诊断。尤其是免疫组化在肿瘤诊断和鉴别诊断中的实用价值受到了普遍的认可，其在低分化或未分化肿瘤的鉴别诊断时，准确率可达50%-75%。 copyright sysqy.com
为什么临床医生要求加做免疫组织化学？？
临床应用主要包括以下几方面： 本文来自实验室前沿
(1)恶性肿瘤的诊断与鉴别诊断；
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(2)确定转移性恶性肿瘤的原发部位；
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(3)对某类肿瘤进行进一步的病理分型； 本文来自实验室前沿
（4）软组织肿瘤的治疗一般需根据正确的组织学分类，因其种类多、组织形态相像，有时难以区分其组织来源，应用多种标志进行免疫组化研究对软组织肿瘤的诊断是不可缺少的； sysqy.com
（5）发现微小转移灶，有助于临床治疗方案的确定，包括手术范围的确定。
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（6）为临床提供治疗方案的选择。 copyright sysqy.com
