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流式细胞术(FCM)检测T淋巴细胞规程及注意事项

时间:2011-08-04 01:55|来源:实验室前沿| 分享|点击:


T淋巴细胞包含有不同的亚群,其中较为重要的有:CD广(总T细胞)、CD广(辅助与诱导T细胞)、CD广(抑制与细胞毒T细胞)。它们在不同情况下产生的调节因子和趋化因子有所不同。

本文来自实验室前沿

    [检测方法]  流式细胞术(FCM)
    [方法学原理]  利用不同荧光物质标记的抗CD3、CD4、CD8单克隆抗体,与待测成分作用,然后上流式细胞仪检测待测细胞。待测细胞随流动室内的流动鞘液排列成单列,一个个迅速通过激光聚焦区,激光在对每个细胞进行照射时可同时得到前向角散射和侧向角散射2种散射光以及激发荧光标记物质发出的信号,利用这些信号,可计算出CD3+、CD4+、CD8+的相对含量,从而得出各细胞群的相对比值。
    [标本准备]  EDTA抗凝静脉血2ml。
    [试剂]  不同荧光素标记的抗CD3、CD4、CD8单克隆抗体,同型阴性对照荧光物,溶血剂,固定剂,荧光微球。
    [仪器]  流式细胞仪
    [检测步骤]
    1.100u1抗凝血加20ul荧光单克隆抗体,同时做阴性对照。
    2.避光室温作用20rain溶去红细胞后,固定剂固定。
    3.上流式细胞仪测定,以阴性对照测出本底参数,设定阳性参数值,计算机将读出阳性值。
    [正常参考值]
    CD3+:60%一85%
    CD4+:28%一58%
    CD8+:19%~48%
    CD4+/CD8+ 细胞比值:0.8~2.0
    [注意事项]
    1.为保证所得结果的可靠性,每次试验前应以标准荧光微球检测仪器的变异系数。
    2.每次应做阴性对照、阳性对照、正常对照、质控对照,以确保将各种试剂及操作过程对结果的影响降至最低。
    [临床意义]  T细胞亚群变化的临床意义主要表现在肿瘤、自身免疫性疾病中。在感染性疾病中,因为CD4+T细胞是辅助、诱导T细胞的标志,CD4+T细胞下降常见于某些病毒感染性疾病,如AIDS、巨细胞病毒感染、瘤型麻风。而CD4+T细胞长期低于正常水平,常提示患者易于被病毒等微生物侵袭。CD8+是抑制、杀伤T细胞的标志,在传染性单核细胞增多症、巨细胞病毒感染、慢性乙型肝炎等感染性疾病中,CD8+T细胞常升高。CD4+/CD8+细胞比值下降,除肿瘤等疾病外,常见于AIDS、瘤型麻风、传染性单核细胞增多症、巨细胞病毒感染、血吸虫病等。

 

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Tags:细胞,注意事项,检测,CD,
责任编辑:何辉

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