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RNAi实验方法和原理

时间:2011-02-17 01:19|来源:实验室前沿| 分享|点击:


RNAi实验方法和原理

1. 研究基因功能的新工具 内容来自实验室前沿网站

已有研究表明RNAi能够在哺乳动物中灭活或降低特异性基因的表达,制作多种表型,而且抑制基因表达的时间可以随意控制在发育的任何阶段,产生类似基因敲除的效应。线虫和果蝇的全部基因组序列已测试完毕,发现大量未知功能的新基因,RNAi将大大促进对这些新基因功能的研究。与传统的基因敲除技术相比,这一技术具有投入少,周期短,操作简单等优势,近来RNAi成功用于构建转基因动物模型的报道日益增多,标志着RNAi将成为研究基因功能不可或缺的工具。

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2. 研究信号传导通路的新途径 内容来自实验室前沿网站

联合利用传统的缺失突变技术和RNAi技术可以很容易地确定复杂的信号传导途径中不同基因的上下游关系,Clemensy等应用RNAi研究了果蝇细胞系中胰岛素信息传导途径,取得了与已知胰岛素信息传导通路完全一致的结果,在此基础上分析了DSH3PX1与DACK之间的关系, 证实了DACK是位于DSH3PX1磷酸化的上游激酶. RNAi技术较传统的转染实验简单、快速、重复性好,克服了转
染实验中重组蛋白特异性聚集和转染效率不高的缺点, 因此认为RNAi技术将可能成为研究细胞信号传导通路的新途径。

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3.开展基因治疗的新策略

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RNAi具有抵抗病毒入侵,抑制转座子活动,防止自私基因序列过量增殖等作用,因此可以利用RNAi现象产生抗病毒的植物和动物,并可利用不同病毒转录序列中高度同源区段相应的dsRNA抵抗多种病毒。
    肿瘤是多个基因相互作用的基因网络调控的结果,传统技术诱发的单一癌基因的阻断不可能完全抑制或逆转肿瘤的生长, 而RNAi可以利用同一基因家族的多个基因具有一段同源性很高的保守序列这一特性, 设计针对这一区段序列的dsRNA分子,只注射一种dsRNA即可以产生多个基因同时剔除的表现,也可以同时注射多种dsRNA而将多个序列不相关的基因同时剔除。

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尽管目前RNAi技术在哺乳动物中的应用还处于探索阶段,但它在斑马鱼和老鼠等脊椎动物中的成功应用预示着RNAi将成为基因治疗中重要的组成部分,人工合成的dsRNA寡聚药物的开发将可能成为极具发展前途的新兴产业。

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5. D-D测定主要用于诊断继发性纤溶亢进症。 内容来自实验室前沿网站

阳性:⑴继发性纤溶亢进症:DIC

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⑵组织纤溶酶原激活物的溶纤疗法

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⑶动脉或静脉血栓性疾病:深静脉血栓形成、肺栓塞等等 sysqy.com

其他:如妊娠、恶性肿瘤、手术等 sysqy.com

原发性或继发性纤溶亢进症的鉴别诊断:由于纤维蛋白原及其降解产物不与DD抗体反应,因此,DD阳性可认为是继发性纤溶如DIC或其他血管内血栓形成的证据。 sysqy.com

DD检测是鉴别原发性和继发性纤溶的良好指标,如DD检测阴性,基本可以排除血栓形成。

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