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副溶血性弧菌免疫学检测方法

时间:2011-02-15 00:42|来源:实验室前沿| 分享|点击:


    免疫学方法特异性强、灵敏度高、易于观察、应用广泛。血清学反应是最基本的免疫学反应,主要用于细菌分型。目前,通过血清学反应,V.p可分为13种O血清型、71种K血清型。正确的分型为流行病学调查和临床用药提供依据。但此反应只能大概区分不同地区和来源的菌株,而且由于抗原位点受环境等因素的影响易发生突变,出现新的血清型时,以现有的血清检测就会漏检。

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    目前,应用最广泛的免疫学方法是酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbentassay,ELISA)。该方法从抗体的包被到酶联显色,都已经具备了成熟的技术,易于制备试剂盒,操作简单,特异性好,灵敏度高。   
 
    由于V.p临床分离株大多为TDH’株,TRH(thermostable related hemolysin)阳性株只占10%一15%,少数为TDH和TRH双阳性,环境分离株几乎无TDH+,所以大多研究者主要选择TDH、TRH为抗原,制备相应的抗体进行检测。ELISA抗体的包被与固定是关键,影响检测的灵敏度和特异性。Honda等设计了一种新的固定方法,即用HCl、聚乙烯(p01ythylenceirnine,PEl)、甲基乙烯基马来酸酐聚合醚(malwie anhydride methylvinyl ether copolymer,MAMEC)等化学试剂处理尼龙膜,接着固定包被TDH和TRH的单克隆抗体,然后与V·p培养肉汤中TDH或TRH反应15min,洗涤后,与抗TDH、TRH的兔血清多克隆抗体37℃反应15min,再与碱性磷酸酶标记的抗兔抗体IgG反应,最后底物显色。结果显示,经过紧密相连的三次抗原抗体反应,特异性100%,灵敏度95.15%,并且通过肉眼观察就能区分TDH株和TRH株。同时,该尼龙膜也可以直接用于检测粪便标本,特异性达88.9%,灵敏度达92%,并能在1h内完成检测。此固定方法减少非特异性吸附,增强抗体结合度,从而增强了特异性,提高了灵敏度。但是,这种方法涉及抗体包被、固定、抗体的标记、显色等步骤,操作烦琐,技术要求高,而且尼龙膜不能长期保存,不能进行大规模临床检测。同时,直接检测时,抗原量可能不足,抗原位点也容易改变,导致出现新的血清型,如近年来出现新的03:K6血清型,最终造成漏检。
Tags:方法,检测,免疫,抗体,血清,
责任编辑:何辉

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