凝胶银染法——铵银染色法
1．戴手套并使用洁净的玻璃器皿以免污染，影响反应的灵敏度。
2．凝胶电泳后，加入5倍于凝胶体积的50％乙醇和10％乙酸，振摇30min至过
3．去除50％乙醇和10％乙酸，用去离子水清洗凝胶。加入5倍体积的20％乙醇，振摇温育30min。
4．去除乙醇，再加入5倍体积的20％乙醇，室温振摇30min。
5．去除乙醇，将凝胶转入抽风橱内。加入5倍体积的用去离子水配制的5％戊二醛。室温振摇温育30min。
6．去除戊二醛，用去离子水清洗凝胶。加入5倍体积的20％乙醇，室温下振摇温育20min。此步及以下步骤无需在抽风橱内进行；
7．去除20％乙醇，重复两次(步骤6)。
8．去除乙醇后，用去离子水清洗凝胶；再加入5倍体积去离子水，室温振摇温育lOmin。
9．去除水，加入4倍体积新鲜配制的氨水／银溶液。配制lOOml：加1．4ml 14．8mol／L氢氧化铵到lOOml水中，再加入190~1iOM氢氧化钠；放置涡漩器上缓慢地逐滴加入lml新鲜配制的硝酸银溶液(0．8g硝酸银／ml水)，直至出现沉淀物，但很快溶解。室温下振摇温育30min。
10．去除氨水／银溶液，用去离子水清洗凝胶20min以上，其间换水数次。用盐酸沉淀用过的氨水／银溶液回收银。
11．去除水，加入5倍体积新鲜配制的0．005％柠檬酸，0．019％的甲醛(用37％的市售甲醛稀释)。轻柔混匀，数分钟后条带即显现出。当背景开始变化时，去除显影剂，用去离子水清洗凝胶。在10％乙酸和20％乙醇中温育凝胶以终止反应。
灵敏度大约为1～long蛋白／每条带。
注：一些公司可提供较好的银染色试剂盒。
凝胶银染法——中性银染色法
1．戴手套并使用洁净的玻璃器皿以免污染，影响反应的灵敏度。
2．凝胶电泳后，加入5倍于凝胶体积的30％乙醇和10％乙酸，振摇30min至过夜。
3．去除乙醇／乙酸溶液，加入5倍体积的30％乙醇，室温下振摇温育30min，重复用30％乙醇清洗。
4．去除乙醇溶液，加入10倍体积的去离子水，室温振摇温育10min。重复用水清洗两次。
5．去除水，加入5倍体积的0．1％的硝酸银溶液(用室温下贮存于棕色瓶内的20％原液稀释而得)。室温振摇30min。
6．去除硝酸银溶液，用去离子水清洗凝胶20s。
7．加入5倍体积的2．5％碳酸钠和0．02％的甲醛(pH<4．0)。室温振摇温育，分钟后条带即可显现。直到背景开始变黑时，停止温育。
8．在1％乙酸内清洗停止反应。用去离子水清洗，更换数次，每次10min。灵敏度大约为1～10ng蛋白／每条带。
注：①如需加强银染效果，可重复第5—8步骤。②一些公司可提供较好的银染色试剂盒。
