固相膜免疫检测(solid phase membrane-basedimmunoassay)与固相酶免疫测定(ELISA)相类似,其特点为以微孔膜作为固相。标记物可用酶和各种有色微粒子如彩色胶乳、胶体金、胶体硒,以红色的胶体金最为常用。固相膜的特点在于其多孔性。像滤纸一样,固相膜可被液体穿过流出,液体也可以透过毛细管作用在膜上向前移行。利用这种性能建立了两种不同类型的快速检测方法。
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在固相膜免疫测定中,穿流形式的称为免疫渗滤试验(immunofiltration assay,IFA);横流形式的称为免疫层析试验(immunochromatographieassay,ICA)。因常用胶体金作为标记物,国内文献中称前者为免疫金溶胶斑点法和滴金免疫测定法等,称后者为胶体金免疫层析法等,统称“金标”。
固相膜
膜是固相膜免疫测定试剂的主要原材料,对于试剂的质量起决定性作用。常用的膜为硝酸纤维素膜。硝酸纤维素膜本身为疏水性,在膜的制作过程中加入了表面活性剂,成为亲水性,对蛋白质有很强的吸附性能。在选择合适的硝酸纤维素膜时应注意以下特征。
1.孔径 即能通过粒子的大小,以微米(Atm)表示。用于穿流法的膜一般选择0.4um左右,用于横流法的膜可选择5~lOum。
2.流速 以ml/(cm2·min)表示。流速与孔径有一定关系,孔径越大,流速快。在横流法中选择合适的膜时,流速较孔径更有参考价值。
3.蛋白质结合力 以ug/cm2表示。
4。均一性 优质的膜应具有良好的均一性,这样才能保证试剂批号内的均一性。