材料与试剂
（1） 平衡缓冲液；
（2） 反应缓冲液；
（3） TdT酶；
（4） 反应终止/洗涤液；
（5） 过氧化物酶标记的抗地高辛抗体；
（6） 蛋白酶K消化液：20μg/ml蛋白酶K溶于PBS；
（7） 30％H2O2；
（8） DAB显色液：0.05％的diaminobenzidine （DAB）溶于PBS，用前过滤并加入0.02％H2O2；
（9） 甲基绿染液：0.5％甲基绿溶于0.1mol/L枸橼酸钠，pH调整到4.0；
（10） 塑料盖玻片及玻璃盖玻片。
样品来源：同荧光标记法。
操作步骤
(1) 固定：同荧光标记法；
(2) 内源性过氧化物酶封闭：玻片置于盛有0.5％H2O2缓冲液的染色缸内，室温下作用20min 后，同荧光标记法洗涤；
(3) 消化：玻片浸于盛有蛋白酶K消化液的染色缸，室温下消化15min，同上洗涤；
(4) 平衡处理：将细胞或组织周围液体用吸水纸吸干，滴加平衡缓冲液（按70μl/cm2）覆盖细胞或组织表面，盖上塑料盖玻片，室温下作用5～10min；
(5) 反应：移去盖玻片，倾去平衡液，用吸水纸吸干周围液体，滴加反应液（按50μl/cm2， 18μl TdT酶+36μl反应缓冲液），均匀覆盖在细胞或组织上，盖上塑料盖玻片，置湿盒中，37℃温育1h；
(6) 终止反应：移去盖玻片，将玻片置于盛有终止/洗涤液的染色缸内，37℃下洗涤30min（置摇床上振摇）。然后将玻片置于洗涤缓冲液内，洗2次，每次5min。
(7) 地高辛抗体反应：用吸水纸吸干细胞或组织周围液体，滴加70μl过氧化物酶标记的地高辛抗体，均匀覆盖，加上塑料盖玻片，室温下置湿盒中孵育30min；
(8) 洗涤：置于洗涤缓冲液内，洗2次，每次5min；
(9) 用吸水纸吸干细胞或组织四周液体，滴加新鲜配制的DAB显色液，均匀覆盖，加盖塑料盖玻片，室温下作用3～6min；
（10）洗涤：置于蒸馏水中洗三次，每次3～6min；
（11）套染：将玻片置于盛有甲基绿染液的染色缸中，室温下染色10min；
（12）洗涤：蒸馏水洗涤三次（置摇床上），每次2min；
（13）脱水、封片：100％正丁醇，三次，每次2min；二甲苯，三次，每次2min；明胶甘油封片；
【结果判断】
光学显微镜下观察，所有细胞核均着绿色，凋亡细胞核染色质显示出特异性的棕黄色。
