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神经生长因子(NGF)的检测技术

时间:2010-12-30 07:24|来源:实验室前沿| 分享|点击:


根据神经生长因子(nervegrowthfactor,NGF)对神经细胞的促增殖作用,可采用PCI2细胞分化试验检测其活性。PCI2细胞是大鼠的嗜铬细胞瘤细胞株,培养于含15%马血清、5%FCS的RPMI-1640培养液中,在普通培养瓶中成团悬浮生长。将培养瓶包被鼠尾胶后,PCI2可贴壁生长。 实验室前沿,了解实验室动态

   1.将PCI2置36%,7。5%C02条件下培养,每2天更换2/3培养液,待细胞接近汇合时,用含1mmol/L  EGTA的上述培养液培养细胞6h或过夜,用RPMI-1640/水(1:1)洗涤细胞3次,吹打分离单个细胞,按1:4分瓶继续培养。
 
    2.用上述培养液将PCI2细胞配成106/mL,每个35mm培养皿中加入0.5mL细胞悬液和系列稀释的NGF待测样品或标准品,设不加NGF为对照。继续培养20—24h。
 
    3.在倒置相差显微镜下观察PCI2细胞。细胞成簇生长,计数100个细胞簇,其中细胞有纤维突起的细胞簇为阳性细胞簇,减去不加NGF对照细胞孔中的阳性细胞簇即为NGF诱导的分化细胞簇数。以分化细胞簇数对样品稀释度作图,绘制剂量-反应曲线,计算样品中NGF的含量。 
Tags:因子,生长,神经,细胞,培养,NGF,PCI2,
责任编辑:何辉

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