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单个噬菌体的鉴定

时间:2010-06-01 14:37|来源:实验室前沿| 分享|点击:


     在观察到富集时,筛选过程也就成功了。一个噬菌体群落必须要达到的首要标准就是相对于无插入噬菌体的富集,这也就是为什么我们建议用“相对于非重组噬菌体的倍数”作为因变量,以图表的形式来描述数据。在相同靶标上的噬菌体比噬菌体的比较告诉我们,重组多肽的细胞结合活性比噬菌体自身的非特异性结合性更强。这个对照并不排斥噬菌体比噬菌体的比较,而是领先于这个比较,因为这是一个更具包容性的基准。一个噬菌体群落在能显示相对于其他器官和组织的富集之前,必须首先显示一个相对于非重组噬菌体的富集。 sysqy.com

 
    在数据中出现两倍的差异属于正常变化,并且通常体内富集度的范围是5—200倍,而体外的富集度则是10~104倍。
 
    一旦得到了一个至少显示了相对于非重组噬菌体的富集的噬菌体群落,我们就对单个噬菌体测序,并根据该测序结果来选择样品,用于下一步试验。然后再决定这些选出的相对于非重组噬菌体的克隆的体外结合及体内定位。用噬菌体计数的方法来计算体外结合或体内定位的阳性克隆,通过免疫组化或免疫荧光实验来更进一步地分析。最终,使用合成的荧光标记的同源多肽,通过抑制性和生物分布(bio-distribution)的研究来分析特异性。
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责任编辑:何辉

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