原位杂交组织化学常用试剂及处理(5)
时间:2009-12-30 03:10|来源:实验室前沿| 分享|点击:次
目前应用原位杂交方法中，信号的显示主要有放射自显影，酶底物及免疫金银等方法，在此归纳有关的主要试剂。
1．A-B显影液
称取上述试剂，按配方分别溶于50ml ddH2O中，于显影前，在室温将两者（A液及B液）按1：1混合，稍加摇动促进混合，即可将贴有切片标本的切片放入显影液，于室温避光（可暗室）反应5～15min。显影时间和温度相关，需自己根据情况摸索。终止反应只需将显影液倒出，自来水冲洗即可。倒出的AB显影液可暂时不扔，光镜下观察，若明显显影不够，还可重新或继续显影。AB显影液要求临用前配制，在显影时才将AB二液混合。否则，A液过久会产生黄色沉淀，增加背景。
AB液用于免疫金银法中，使金标记颗粒信号放大，形成棕黑色沉淀。
2．DAB-H2O显色液
配制方法见附录一。
该液用于标本被标记上辣根过氧化物酶（HRP）的方法。产物为棕黄色。
3．NBT-BCIP显色液
配制方法，详见附录一。
该液用于有碱性磷酸酶标记物的方法中。产物为紫蓝色。
4．Kodak D-19显影液
配制：先将500ml水中加温50℃，按上述配方顺序加药，同时充分搅拌，每加一种药完全溶解后，再加另一种药品，否则，所配的显影液易产生混浊而效果差，最后补足水至1000ml充分混合，室温或4℃避光保存。最好包上纸。
该液用于放射自显影时的显影。
5．Kodak F-5定影液（酸性坚膜定影液）
※：28%醋酸为3份冰醋酸和8份水混合液。
配制：同Kodak D-19显影液。
