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水泡性口炎ELISA诊断技术

时间:2009-12-28 02:33|来源:实验室前沿| 分享|点击:


①酶联免疫吸附试验(ELISA)。Workman等于1986年建立了快速、敏感和方便使用的ELISA检测方法,用该方法对牛的血清进行检测,并应用于VSV和其他水疱性疾病的鉴别诊断。S.D.Vernon等将一株从马体内分离到的VSV-NJ病毒经黑斑蚊细胞系传代一次后试验感染马和牛,采集血清,同时取1982年大流行期间马和牛的血清,分别用血清中和(SN)、补体结合(CF)、间接免疫荧光(IFT)和酶联免疫吸附试验(ELISA)进行检测,并对ELISA方法进行标准化。在IgM期,中和抗体滴度和ELISA检测滴度相当。当IgM的ELISA滴度消失,中和滴度达到最高。补体结合(CF)和间接免疫荧光(1FN)检测的抗体滴度接近于ELISA检测的IgM期抗体滴度。这种建立的IgM捕捉ELISA(MC-ELISA)检测方法可快速检测牛和马的IgM抗体,有利于及早发现被感染病例。 sysqy.com

    ②间接ELISA(1-ELISA)。S.Ahmad等在昆虫细胞内表达了NewJersey型VSV的N蛋白基因,融合蛋白在sr9中可溶性表达占40%,非可溶性表达占60%。在昆虫体内,非可溶性表达可达到68%。并用直接裂解被感染的昆虫包被ELISA板,重复检测了10000份血清样品。建立了间接ELISA方法,通过检测可区分自然感染和重组G蛋白免疫。
A.Afshar等用甲醛灭活的Indiana型和NewJersey型VSV作为抗原包被ELISA板,将待检血清做l:200稀释,用辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗牛IgGl的单抗作为二抗,建立了间接ELISA(1-ELISA)检测方法,通过对1495份来自加拿大非疫区的微量血清中和试验(MTSN)结果为阴性的牛血清样品、429份来自美国和墨西哥疫区的牛血清样品检测,表明这种间接ELISA(1ELISA)和微量血清中和试验相比特异性为99.8%~99.7%。
    ③间接夹心ELISA(ISELISA)。间接夹心ELISA(IS-ELISA)是VS和其他水疱病病毒血清型鉴定广泛选用的诊断方法。特别是用IN血清型三个亚型代表株的病毒颗粒制备的一套多价兔/豚鼠抗血清的ELISA方法,可以鉴定VSV-IN血清型的所有毒株,对于VSV-NJ毒株的检测,单价兔/豚鼠抗血清试剂盒最合适。
    ④竞争ELISA(C-ELISA)。竞争ELISA方法是在普通EI.ISA的基础上建立的,竞争抗体和待检血清反应,然后再和包被抗原进行反应,最后用标记二抗反应并检测。ELISA方法是目前OIE参考实验室的标准方法。
    A.Afshar等用小鼠抗VSVIndiana型和NewJersey型多抗建立了竞争ELISA检测方法。用VSV-NJ和VSV-IN抗原包被ELISA板,将待检血清和VSV一种血清型的小鼠多抗反应,然后用抗鼠的二抗反应。当血清中没有VSV的抗体存在时ELISA板上包被的VSV抗原和相应的(NJ或IN)多抗结合。如果待检血清中含有VSV-NJ或VSV-IN的抗体,他们则和多抗竞争与包被的抗原反应。通过对用VSV-NJ和VSV-IN试验感染的4头牛、2匹马、4只羊和7头猪血清的检测,比较了竞争E1.ISA(C-ELISA)和微量血清中和试验(MTSN)的特异性和敏感性。结果表明,C-ELISA可检测到同源抗体的时间比MTSN早5天。C-ELISA作为一种快速优良的检测方法检测方法比MTSN更具有使用价值。LB.Katz等在昆虫细胞内表达了Indianal型VSV的N蛋白基因,用VSV-INl的全病毒制备小鼠多抗,N蛋白和小鼠的多抗不经纯化,直接应用于C-ELISA检测牛、猪和马VSV-INl的血清抗体,与标准的血清中和试验相比,&ELISA具有快速、敏感、经济以及没有生物安全风险的优点。Chang HeeKweon等用杆状病毒表达了编码VSV-IN囊膜糖蛋白(G)的基因,用表达的G蛋白作为诊断抗原检测牛和马的VSV。而且,用针对VSV-ING蛋白的单抗包被ELISA板应用于mab-linkedindirect ELISA(MLI-ELISA),同时作为检测抗体用于mab-linkedcompetitive ELISA(MLC-ELISA)。用OIE参考实验室的金标准C-ELISA来作为标准,通过对阳性马血清和阴性马血清(用FMD疫苗免疫过)检测。MLI-ELISA和MLC-ELISA的敏感性分别为8%和95%,特异性分别为97%和99%。然而,两种ELISA方法都有对VSV-NJ抗体的交叉反应。试验表明,MLC-ELISA的敏感性和特异性优于MLI-ELISA,MLC-ELISA方法可以用于VSV-IN感染的血清学诊断。
    ⑤IgM捕捉ELISA(MC-ELISA)。K.M.Zhou等建立了用羊抗猪和抗马的IgM为基础的IgM捕捉ELISA(MC-ELISA)应用于VSV初期感染的检测。用生物素标记的羊抗马和猪的IgM包被ELISA板,这些包被的IgM和检测样品中的VSV-NJ或VSV-IN结合,然后再和抗VSV-NJ和VSV-IN的鼠多抗反应。通过用MC-ELISA方法、C-ELISA和MTSN同时检测试验感染的马和猪的血清样品,结果表明这种MC-ELISA方法能够特异性检出同源IgM抗体最早在感染后5天和4天,最晚至感染后35天。MTSN可检出抗体最早在感染后5天,最晚在感染后160天。C-ELISA最早检出时间为感染后6-7天,最晚至160天。经过比较,这种建立的MC-ELISA方法可以应用于马和猪VSV的早期感染诊断。
Tags:技术,诊断,ELISA,血清,检测,方法,
责任编辑:何辉

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