【试剂与设备】
（1）待检细胞：PBMC，脾细胞，淋巴结细胞或经过相应病毒感染细胞（注意其HLA-A型别）刺激形成的CTL细胞
（2）FACS缓冲液（FB）：PBS+2%小牛血清+0.1%叠氮钠
（3）2 X HLA-I/抗原肽四聚体：2倍使用浓度的HLA-I/抗原肽四聚体
（4）1%多聚甲醛(PFA)的PBS
（5）离心机
（6）流式细胞分选仪
（7）加样器、吸头等
【操作步骤】
（1）将待检细胞悬浮于FACS缓冲液，浓度为5 X 107细胞/ml。
（2）在微量滴定板中每孔加20μl细胞悬液。
（3）每孔加入20μl 2 X 四聚体试剂，吹打混匀，尽量避免气泡。
（4）在黑暗中冰浴1小时。
（5）加150μl FB,1200rpm离心5分钟。轻轻弹掉上清，也可以用抽吸的方法弃去上清，注意抽吸容易损失细胞，但是可避免有感染性或有害的样本造成污染。
（6）重复洗涤2次，方法同步骤（5）。
（7）用含1%多聚甲醛(PFA)的PBS 200μl 重悬细胞。PFA似乎可以增加一些“绿色”荧光标记的检出率。
（8）用FACS检测。
【注意事项】
（1）为了节省试剂，应设法使染色反应的体积尽可能小。通常加20μl的2X 四聚体试剂于20μl的2 X 细胞悬液，总体积为40μl。这仅作参考，可以根据实际情况调整反应体积。
（2）所有的染色反应都应在4 oC进行。有时在室温下的染色强度更高。但有些表面标记对高温较敏感，特别是CD62L。
（3）在作较大规模实验时，应先测试剂的效价。上述制备的四聚体常用的最终稀释度为1:100。
（4）对于某些四聚体（但不是大多数），染色时可能观察到CD8介导的粘附，即四聚体结合到所有CD8+细胞上。这种CD8介导的粘附（暂且称其为非特异性粘附）能够通过加入CD8抗体阻断。
（5）对于新鲜淋巴细胞（PBMC，淋巴结，脾细胞），通常用1-2 X 106细胞进行染色。对于细胞克隆和CTL细胞系，也许用2 X 105细胞也可能获得满意的染色效果。当对某个细胞克隆进行染色时，最好加入特异性不同的另一细胞克隆作为阴性对照。通常采用的比例为：特异性克隆:非特异性克隆=10:90
