1)4％多聚甲醛固定的组织置15％～20％蔗糖PBS中漂洗，4℃过夜或组织块下沉至杯底； 本文来自实验室前沿
2)制作30～40um厚的振动切片或冰冻切片，PBS漂洗；
本文来自实验室前沿
3)2％H2O2甲醇处理，室温20分钟，封闭内源性过氧化物酶活性；
4)1％BSA室温孵育15分钟；
5)第一抗体4℃孵育12～24小时，PBS漂洗；
6)HRP或生物素标记的第二抗体室温孵育30—60分钟，如系生物素标记的第二抗体，反应后则需进一步按ABC法要求操作；
7)呈色反应：0．03％～0．05％DAB 0．01％H2O2/0．05m01／L Tris—HCl(pH 7．6)显色，适时终止反应，PBS漂洗；
8)1％戊二醛0．1mol／L PB配制固定15～30分钟(4℃)，P13S充分漂洗；
9)样品的锇酸后固定、脱水、包埋、超薄切片制作及电镜观察等处理与常规电镜相同。
环氧树脂包埋前免疫酶染色示大鼠脊髓背角浅层内P物质在轱突终夫中的分布，箭头示高电子密度的免疫反应产物(A1，标记的轴突终末；A2，未标记的轴突终末；D，树突
