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病理制片技术的规范

时间:2009-07-20 03:13|来源:互联网| 分享|点击:


病理技术是病理学诊断不可分割的一部分,制片质量的好坏很大程度上影响病理医生做出正确的病理诊断。因此,保证和提高制片质量是每个病理技术员的责任。为了保证制片质量,减少差错,防范责任事故,避免医疗纠纷,有必要加强对病理技术进行科学规范管理和制片的控制,为提高临床病理诊断水平,促进临床病理学事业的发展做出我们应有的贡献。
一、 高素质技术人员的规范管理
1.要有敬业精神,强烈的工作责任心、
2 努力学习,刻苦钻研,掌握过硬的基本功,引进和学习新技术,工作精益求精。
3.领导重视,为技术人员提供进修学习和提高的机会。
4.技术员和医生,技术员与技术员互相团结,密切配合,发挥团队精神的作用、
二、 仪器设备分规范管理
1.配备先进,高质量的仪器设备是保证和提高制片质量的重要条件、
2.正确使用,定期维修保养,保证仪器设备在最佳的状态下工作、
三、 标本和资料档案的规范管理
1.标本和送检单的接收
检查标本和送检单的名字是否相符,有否标本,有没有病史。标本补充固定液,送检单编号登记。
2.资料档案的规范管理
诊断报告发出后,附有诊断报告记录的送检单、玻片和组织蜡块存档并专人保管。建立严格的资料借出制度,确保档案资料不被丢失。
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四、 技术操作规范
1.及时固定组织:应采用10%~20%甲醛液(10%甲醛液即用浓甲醛液1份加蒸馏水9份稀释)固定组织,因甲醛易氧化成甲酸,因此多会偏酸性,最理想的是配成中性甲醛液。巨大组织要切开固定,小块组织的固定时间约4小时左右,然后取材时修切成大小约22 x 22mm,厚不超过2mm的组织块进行脱水。
取材时必须注意核对编号是否与送检单上的病理号一致,并记录好对大体标本的描述,取材组织的形状和数量。

 

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l 常规固定液的配制
(1) 10%甲醛液
浓甲醛          10ml
蒸馏水          90ml
(2 )  缓冲中性甲醛液
      浓甲醛              10ml
      PBS缓冲液(Ph7.2)  90ml
(3 )  10%中性甲醛液
      浓甲醛              10ml
      蒸馏水              90ml
      碳酸钙           加至饱和
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•冷冻切片固定液
(1) 乙醚酒精液
无水乙醚                   1份
95%酒精                    1份
(2) 酒精—冰醋酸液
95%酒精                  100ml
冰醋酸 3~5滴
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•细胞学涂片固定液的配制
(1) 酒精—冰醋酸液
95%酒精                    97ml
冰醋酸 3ml
(2) 乙醚--酒精液
 95%酒精                   50ml
 乙醚                      50ml
冰醋酸                      1ml
(3) Carney`s液
无水酒精                   60ml
氯仿                       30ml
冰醋酸                     10ml

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2. 脱水彻底:脱水液常用乙醇,用乙醇脱水要由低浓度逐级上行至高浓度(一般70%~100%的浓度),逐步置换组织内的水份。组织在乙醇脱水时,低浓度乙醇的时间可适当延长,高浓度乙醇脱水时间不能过长。
3. 透明充分: 透明液多采用二甲苯,组织脱水后转入二甲苯,依据组织的大小、厚薄,约置30~90分钟。
4. 浸蜡足够: 浸蜡多用纯净而熔点稍低(56~58度)的石蜡,浸蜡时采用三级或四级,以尽量清除二甲苯。浸蜡时间依据组织大小厚薄而定,一般为1~2少时。浸蜡时包埋机所设定的温度应比所用石蜡熔点稍高以保持石蜡恰在熔溶状态。这样,组织才能取得良好的浸蜡效果。如浸蜡温度过高,导致组织收缩,变硬变脆,难以切出理想切片。
5. 包埋恰当:包埋时,包埋石蜡的温度要比组织高(约3~5度),否则包埋冷凝后组织与包埋石蜡分离,特别是在冷天包埋时,动作更要迅速,否则容易导致组织与石蜡融合不好,影响切片。包埋是时把组织最大最平切面或所需是病灶切面向下,对皮肤、肠管和囊壁等层次清楚的组织其切面应包含有各层组织。
组织包埋完后,要与取材时记录的组织形状和数量核对,发现问题,及时解决。
6. 切片要薄:切片首要任务是把切片刀研磨锋利,这是能否切薄而平整切片的关键。其次要把刀架上的切片清除角调至2~5度,在此角范围内,才能切出良好蜡片。如使用一次性刀片,可转动刀座上的弧形刻度盘选取最合适的刻度(该合适刻度并不等于真正的切片清除角)。切片前要把切片机上有关的各螺旋拧紧,如没有拧紧或包埋少组织蜡块过硬时就会出现跳片,使蜡片成一截厚一截薄。切片的厚度应为3~4μm,对一些组织如淋巴结、鼻咽和扁桃体,切片的厚度应为2~3μm 。

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7。贴片烤片:切出的蜡片应放在恒温贴片盆内展开,并根据所用包埋石蜡的温度调节水温在42~46度左右。为了利于展平蜡片,可先把蜡片放在一缸缸约10~15%乙醇内,然后用玻片再将蜡片移至恒温贴片盆,由于水的表面张力比乙醇大,蜡片由乙醇移至水后就很容易展平。贴片时再注意“定点”和“定向”。最后即可置入约60~65度的烤片箱内烤15~30分钟,也可放在热板上烘干,蜡片就可牢固地粘附在载玻片或盖玻片上。
8. 切片在染色前必须脱蜡干净:未完全脱蜡的组织切片,染色后组织和细胞模糊不清。脱蜡要用两级或三级脱蜡剂如二甲苯,时间为10~20分钟,应视所用二甲苯的新旧以及室温情况而定。脱蜡时间宁可长些,不应过短。
9. 苏木素染液一定要配好:苏木素液配制的好坏,决定染色的优劣。苏木素配制有多种配方,关键在于氧化。如加氧化汞作氧化剂时,要防止氧化过度,同时注意形成的氧化膜污染切片。加碘酸钠作氧化剂时,就无需把苏木素液煮沸。要配制自然成熟的苏木素则不需加氧化剂,但要较长时间才能氧化成熟。不同苏木素染液的染色时间为5~20分钟,自然氧化成熟的苏木素液染色时间可以更长。
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**苏木素染液的配制
(1) Harry`s苏木素
苏木素       1g
无水酒精    10ml
硫酸铝钾     20g
蒸馏水     200ml
氧化汞       0.5g
冰醋酸       8ml
分别用无水酒精溶解苏木素,蒸馏水加热溶解硫酸铝钾,然后两液混合并煮沸,加入氧化汞,继续加热和搅拌至溶液为深紫色,立即冷却,恢复至室温后过滤备用。
(2) 改良Lillie-Mayer`s苏木素
苏木素       2.5g
无水酒精     20ml
硫酸铝钾      5g
蒸馏水      330ml
碘酸钠       250mg
甘油        150ml
冰醋酸       10ml
   分别用无水酒精溶解苏木素,蒸馏水溶解硫酸铝钾,然后两液混合后,依次加入碘酸钠、甘油和冰醋酸。
(3) Mayer`s苏木素
苏木素     100mg

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蒸馏水     100ml
碘酸钠     20mg
硫酸铝铵     5g
柠檬酸    100ml
水合氯醛     5g
用蒸馏水溶解苏木素后,依次加入碘酸钠、硫酸铝铵和水合氯醛,过滤后备用。
  10.掌握好盐酸酒精的分化:这是一个重要环节。分化时间的长短视组织的性质,切片的厚薄,苏木素染色的深浅来决定,一般是1~2秒,若切片不分化或分化不足,组织着色过深使核浆的景界不清楚;若分化过度,胞核过淡不清晰 。用Mayer`s苏木素染色,通常都不分化。盐酸酒精分化后,切片留有酸液,易使切片褪色。另一方面苏木素经流水冲洗来促兰。流水冲洗一般需15~30分钟。如要说短时间,可用碱性的促蓝液代替流水冲洗。
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**盐酸--酒精分化液的配制
浓盐酸      1 ml
70%酒精     99ml

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**促蓝液的配制
(1) Scott促蓝液
重碳酸钠   0.35g
硫酸镁       2g
蒸馏水    100ml
麝香草酚少量
(2 )  氢氧化氨水溶液
    浓氨水 0.1~1ml
   蒸馏水 99ml
(4) 碳酸锂水溶液
碳酸锂 1g
蒸馏水 100ml
 11.曙红染色要适宜: 曙红是作为对比染色,染色时不应染的太红,也不能染得太淡,否则红兰对比不鲜明。每200ml曙红水溶液加一滴冰醋酸可起促染作用,如加酸太多,可使曙红沉淀而慢慢失效。曙红水溶液易发霉,每缸曙红液加入甲醛液1~2滴有防霉作用。
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**曙红液的配制
(1)0. 25~0.5%曙红Y水溶液
曙红Y       0.25~0.5g
蒸馏水        100ml
冰醋酸         1滴
(2)0.5曙红Y—氯化钙水溶液
曙红Y         0.5g
蒸馏水       100ml
无水氯化钙   0.5g
(3)0.25~0.5%曙红Y酒精溶液
曙红Y       0.25~0.5g
80%酒精        100ml
12.切片脱水透明要彻底:HE染色后,要彻底脱水透明,才能进行树胶封盖,成为永久标本。如果脱水透明不彻底,封片后呈白色雾状,镜下模糊不清,过一段时间染片就褪色。脱水要经过多次无水乙醇,也可使用石炭酸二甲苯进行脱水。如采用后者,染片要经过多次二甲苯以除去石炭酸。

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  **石炭酸—二甲苯混合液的配制
      石炭酸(加热到约60度)     1份
      二甲苯                   3份
13.封胶要求中性,浓度适宜: 酸性的树胶可使胞核褪色,如树胶放置时间过长,因氧化而变酸。国产树胶偏酸,易使切片褪色。树胶过浓,封片时容易导致气泡,树胶过稀,封片时使胶外溢,影响美观。
14. 在整个染色过程中不让切片干涸:  切片完全干涸,会使组织收缩、割裂,形成所谓”龟裂”现象。也会使部分细胞核透明不良,看起来像黑色的细胞核。
完成染色后,每张片子要在显微镜下观察,检查制片过程中有没有发生差错。不好的片子不交给医生。

本文来自实验室前沿


**** HE切片的质量要求
一张高质量的HE切片要做到:
1. 切片完整、贴片恰当
2. 切片较薄而均匀
3. 无皱折
4. 无刀痕
5. 染色清晰、核浆分明、透明度好
6. 无固缩、龟裂、污染
7. 封胶适当、玻片清洁
8. 字体端正、号码清楚
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Tags:规范,技术,制片,组织,苏木素,
责任编辑:梁英杰

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