以放射免疫法为例。其原理是利用样品IL-1与 125 I标记的IL-1竞争结合吸附在Sepharose4B上的多克隆抗IL-1抗体以测定其含量，该方法可排除其他因子的干扰，还可区分IL-la和Iblb操作步骤如下： ① 将纯化的抗IL-1抗体结合于Sepharose4B上，然后悬于PBS中； ②...[阅读全文]

当FITC在碱性溶液中与抗体蛋白反应时，主要是蛋白质上赖氨酸的r氨基与荧光素的硫碳胺键(thiocarbmide)结合，形成FITC-蛋白质结合物，即荧光抗体或荧光结合物。一个IgG分子中有86个赖氨酸残基，一般最多能结合15～20个，一个IgG分子可结合2～8个分子的FITC，...[阅读全文]

补体C4溶血活性的测定(试管法) 将豚鼠血清用水合肼或氨水处理去除其中的C4，这种C4缺乏血清(简称R4)不能使致敏的SRBC溶解，当加入含有C4的受检血清后，级联酶促反应发生即可导致致敏的SR，BC溶解。溶血的程度与待测血清中C4的活性相关。 1．无补体C4-抗原抗...[阅读全文]

寡核苷酸的纯化过程在DNA全自动合成仪上是自动进行的，但也有以下几种手工方法可以选择。 1．NAP柱纯化 由Pharmacia公司生产，主要成分为SephadexG-25，经特殊处理后装成不同体积的小柱，常用的有NAP-10。含寡核苷酸片段的氨水溶液，调整体积为lml加样于NAP-...[阅读全文]

电泳是通过电场作用将C4迁移率不同的同种异型分离开，然后依照分型标准定型。在某些情况下，C4A某种同种异型与C4B某种同种异型迁移率相同不易区分开，此时可用溶血覆盖技术加以区别。 1．原理 用肼处理豚鼠血清，可灭活其补体成分C4，使之成为帜缺乏的血清。...[阅读全文]

1．准备工作 蛋白A或蛋白G微珠混悬液可在用前准备，4℃保存于含叠氮钠的溶液中。 2．所需溶液和特殊设备 裂解缓冲液、抗体、蛋白A或蛋白G微球(用含0．02％叠氮钠裂解缓冲液配成10％(V／V)的混悬液，4℃保存)、不含DTT的Laemmli样品缓冲液(2％SDS、10％甘油、...[阅读全文]

制备表达标记蛋白的细胞提取物，以进行SDS凝胶电泳。抽提物可为宿主细胞系统的可溶性蛋白提取物，或是其总蛋白提取物。在样品缓冲液中抽提物蛋白的浓度不应超过10mg／ml。选择适当的SDS聚丙烯酰胺凝胶浓度配方，使其在标记蛋白的预计分子量范围之内，可较好...[阅读全文]

环状沉淀试验是Ascoli于1902年建立的，其方法是：先将抗血清加入内径1.5～2mm小玻管中，约装1/3高度，再用细长滴管沿管壁叠加抗原溶液。因抗血清蛋白浓度高，比重较抗原大，所以两液交界处可形成清晰的界面。此处抗原抗体反应生成的沉淀在一定时间内不下沉。...[阅读全文]

HA标记物是流感病毒血凝素蛋白的一个表位。Niman(1983)用流感病毒HAl蛋白的75～110氨基酸残基的肽段免疫小鼠，获得特异性单抗，称为12CA5(当时称H26D08)，其识别的(Wilson et a1．1984)合成肽表位序列为YPYDVPDYA。Field等(1988)将其作为表位标记物，用来标...[阅读全文]

1．切片固定后用毛细滴管吸取经适当稀释的免疫血清滴加其上，置于染色盒中保持一定的湿度，37℃环境下作用30min。然后用0．01mol／L pH7．2 PBS洗2次，每次10min，用吸水纸吸去或吹干余留的液体。 2。滴加间接荧光抗体(如兔抗人广球蛋白荧光抗体等)，同上步...[阅读全文]