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  • [免疫室] 蛋白A—金(PAG)放大技术法

    为了得到更明确的染色结果,在用IGS方法定位细胞抗原时可采用搭桥法,使IGS得到放大,这里介绍一种用抗A蛋白抗体作桥的PAG放大法。由于抗蛋白A抗体既能通过Fab段又能通过Fc段与PAG上的蛋白A结合,因此与其他桥抗体相比,它能够在抗原位点处聚集更多的胶体金...[阅读全文]

  • [免疫室] AP融合蛋白的检测方法

    (一).酶裂解测定法 1.在离心管中加入恒定浓度(15ug)的AP融合蛋白以及相应的能够结合此融合蛋白的抗亲和性结构域标签树脂。室温反应2小时,温和摇动。 2.5000g离心1分钟,弃去上清。用1mlTE重悬并再次离心。以TE和蛋白酶反应缓冲液分别洗涤树脂一次。 3...[阅读全文]

  • [免疫室] 着丝点抗体的检测技术方法

    常用的检测方法是间接免疫荧光法(11F),抗原基质为培养的、至少含有几个分裂期的Hep2细胞。荧光图形是间期细胞核浆呈散在颗粒着染,中期板着丝点呈强荧光着染。 蛋白质印迹法(免疫印迹法)可检测CENP抗原的特性。以组织细胞核粗提物作为抗原基质,不仅可检测A...[阅读全文]

  • [免疫室] 免疫印迹操作步骤及方法

    一、主要内容 检测限为220fmol,或约0.1~lng的50kDa蛋白质 有多个操作步骤,需2天(或1天)时间完成。 检测抗原的存在,定量及其大...[阅读全文]

  • [免疫室] 以蛋白质序列为基础的预测

    以蛋白质序列为基础的相互作用预测有好些方法,主要有以直系同源为出发点、以功能域为基...[阅读全文]

  • [免疫室] 控制基因转录区域的检测

    研究任何基因的第一个步骤是确立可能包含有调控元件的大区域,相关的一些进展已加快了在缺乏单个顺式调控元件特征的情况下对这个区域的预测。这些工具一般可以划归为两大类:转录启动子(转录起始位点)和增强子的查找。这些方法会受到直系同源基因序列的保守...[阅读全文]

  • [免疫室] 蛋白质顺序(结构)的推测与测定

    结构测定 蛋白质一级结构的测定又称蛋白质顺序分析,其基本方法是:①应用化学裂解法和蛋白酶水解法将多肽链专一性裂解。②逐一测定每个纯化的小肽段的顺序。③根据肽段氨基酸顺序中的重叠区确定小肽段的排列次序。④完成整条多肽链的顺序分析。 尽管蛋白质...[阅读全文]

  • [免疫室] 转化生长因子α(TGF-α)的检测技术

    转化生长因子(transforming growth factor-,TGF-)的结构和功能与TGF相似,属EGF家族。检测EGF生物学活性的方法也可以检测TGF-的活性。此外,EGF能诱导3T3小鼠的J2细胞合成DNA,TGF-与EGF竞争受体,抑制EGF的作用,故可通过抑制EGF诱导的DNA合成试验检测TGF-...[阅读全文]

  • [免疫室] 细胞内细胞因子的测定

    采用FCM免疫荧光技术可从单细胞水平检测不同细胞亚群中的细胞因子,用两种不同的荧光素分别标记不同的抗体可在同一细胞内同时测定两种不同的细胞因子。甚至可利用多种参数流式细胞术对胞内多种细胞因子进行测定。 1.PBMC的分离 通过淋巴细胞分层液分离PBMC...[阅读全文]

  • [免疫室] 血管内皮细胞生长因子(VEGF)的检测技术

    血管内皮细胞生长因子(vascular endothelialcell growth factor,VEGF)属PDGF家族,主要由垂体中滤泡星形细胞产生,能诱导血管生成,其作用没有种属特异性。血管内皮细胞可作为检测VEGF促细胞增殖实验的靶细胞。 1.血管内皮细胞增殖试验 用AEC或人脐带静脉...[阅读全文]

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