同大小的蛋白质分子进入胶体过滤管柱，可依其分子差异分离；是一种广泛应用的partition色析法 (Pharmacia操作手册, Gel Filtration)。 仪器设备：色析管柱 (Pharmacia C column, 1.6100 cm)、铁架、铁夹及水平仪；分划收集器 (fraction collector, 需准备干...[阅读全文]

1.免疫荧光单标记方法 免疫荧光单标记是指只标记一种蛋白质分子，方法比较简单，只要按照染色步骤去做，通常不存在太多的问题。但要注意固定液的选择，固定液选择的合适与否，可能会直接影响染色结果。具体染色方法如下。 1)所需材料与试剂 (1)培养在盖玻片...[阅读全文]

流式细胞仪最大的贡献在于促进了免疫学基础研究和临床诊断。目前流式细胞术已被广泛用于细胞生物学、免疫学、肿瘤学、血液学、病理学、遗传学和临床检验等多学科领域的基础和临床研究。 1 ．流式细胞仪的功能 （1）细胞参量分析 包括细胞大...[阅读全文]

目前尚无公认的标准化的测定方法，常用的有： (1)蛋白质印迹法：经SDS-PAGE分离牛或人CNS髓磷脂，将蛋白质转印至硝酸纤维素膜，而后与稀释的检测血清孵育，洗涤后加入辣根过氧化物酶标记的羊抗人IgM，经二氨联苯胺染色；或者依次加入一抗(兔抗人IgM)，二抗(...[阅读全文]

AChR抗体是否结合到了肌细胞AChR上，可用125I--BuTx标记肌细胞抽提物以免疫沉淀法来检测，此方法同样可以用来检测患者血清中的抗AChR抗体。血清15／ll加入标记的抽提物中室温下2h或4~C过夜，5000rpm离心3分钟取沉淀，经离心洗涤23次，然后用丁计数仪计数。用...[阅读全文]

A．酶裂解测定法 1．在离心管中加入恒定浓度(15ug)的AP融合蛋白以及相应的能够结合此融合蛋白的抗亲和性结构域标签树脂。室温反应2小时，温和摇动。 2．5000g离心1分钟，弃去上清。用1mlTE重悬并再次离心。以TE和蛋白酶反应缓冲液分别洗涤树脂一次。 3．以20...[阅读全文]

一、原理 本法是由Geoghegan等(1978)首次应用金标探针检测B淋巴细胞表面抗原，将胶体金颗粒(大于20nm)标记在第二抗体或SPA分子上，制备成金标二抗。其原理是当特异性抗体与抗原结合后，用金标二抗或金标SPA与特异性抗体结合，形成抗原抗体金标抗体复合物，此...[阅读全文]

免疫共沉淀（co-immunoprecipitation）是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。 其原理是：当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的许多蛋白质－蛋白质间...[阅读全文]

最常用的检测方法是以培养的Hep2细胞为抗原基质的IIF法。AFA荧光图形为间期细胞核仁清晰的块状着染(2～6个)，在分裂中后期细胞染色质呈边缘清晰的致密着染，借此可与其他核仁型抗体区别。 以纯化的核、核仁为抗原基质的蛋白质印迹(免疫印迹)、免疫沉淀法也是...[阅读全文]

最常用的检测方法是以培养的Hep2细胞为抗原基质的IIF法。AFA荧光图形为间期细胞核仁清晰的块状着染(2～6个)，在分裂中后期细胞染色质呈边缘清晰的致密着染，借此可与其他核仁型抗体区别。 以纯化的核、核仁为抗原基质的蛋白质印迹(免疫印迹)、免疫沉淀法也是...[阅读全文]