荧光定量RT-PCR分子诊断技术，配合荧光定量PCR仪可以从基因水平检测禽流感RNA基因，具有高度的敏感性和特异性，并且可大大地缩短对AI病毒的检出时间，克服了传统的禽流感诊断技术包括病毒分离鉴定试验周期长的缺点，为禽流感早期快速诊断提供了敏感、快速、实用的检测方法。在技术流程方面，主要包括样本采集和制备、反应体系准备、荧光定量PCR反应及检测等几个部分。 实验室前沿，了解实验室动态
且Schweiger等在以往流感病毒型别、亚型鉴定RT-PCR法的基础上，应用荧光PCR法对呼吸道标准的流感病毒进行鉴定，在PCR反应中除加入型、亚型特异引物外，同时加入标记荧光的相应型、亚型特异核苷酸片段作为探针，利用Taq酶内源性5’-3’核酸酶活性，将未杂交的荧光探针降解，通过加入猝灭剂消除降解的游离荧光素，避免了以往PCR后烦琐的产物分析过程，并可在扩增反应中随时终止反应，检测即时PCR产物。该方法具有快速、简便、敏感、特异、费用较低等特点，初步应用于临床检验效果良好。
禽流感病毒各亚型均属A型流感病毒，赖平安等根据A型流感病毒共有基因特定的序列，合成一对特异性引物和一条特异性的荧光双标记探针，该探针与禽流感病毒特有的共同基因特异性结合，结合部位位于引物结合区域内，建立了可以直接从临床病料的感染组织中检测所有亚型禽流感病毒的通用荧光RT-PCR技术，可用于禽类相关样品(包括肌肉组织、脏器、咽喉拭子、泄殖腔拭子、血清或血浆等)中禽流感病毒的检测。试验表明该方法可应用于对所有亚型禽流感感染脑T-PCR检测方法》(GB／T19438．1-2004)。
刘环等采用TaqMan方法，在比对禽流感病毒血凝素基因的基础上，设计一对仅在H5亚型禽流感病毒血凝素基因间保守的特异性引物和一条特异性的荧光双标记探针，建立了H5亚型禽流感病毒荧光RT-PCR检测方法，可用于活禽及其产品中H5亚型禽流感病毒的检测，详见《H5亚型禽流感病毒荧光RT-PCR检测方法》(GB／T19438．2-2004)。此外，高志强、张利峰等也建立了H7和H9亚型禽流感病毒相应的荧光RT-PCR检测方法，详见《H7亚型禽流感病毒荧光RT-PCR检测方法》(GB／T19438．3-2004)和《H9亚型禽流感病毒荧光RTPCR检测方法》(GB／T 19438．4-2004)。
荧光RT-PCR与普通RT-PCR相比，在以下几个方面有非常明显的优势。
快速 该方法对PCR产物进行实时监控，省却了电泳和EB染色。与国际标准方法鸡胚病毒分离相比，无须做鸡胚病毒分离培养，4h就可完成试验。
灵敏 由于采用特异性荧光探针和高灵敏度荧光PCR仪，比传统的PCR方法灵敏度高100～1000倍。接近鸡胚病毒分离的敏感性。
特异 由于采用特异性的引物及特异性探针，特异性高于传统PCR方法。
操作简单 该试剂盒给检测者提供了质量优异的试剂及优化的操作程序，经过简单培训，检测者就可胜任该项工作。缺点是需要特殊的仪器(荧光PCR仪)，而且检测成本相对较高，对其在基层检测单位的推广应用具有一定的影响。
我国所建立的检测禽流感病毒的各种荧光RT-PCR方法，在为我国禽流感尤其是高致病力禽流感的防治提供先进、有效的早期快速诊断技术和监测手段的同时，也为高致病力禽流感防制争取到极为宝贵的快速反应时间。
![嗜中性粒细胞来袭时的微细胞之战[图]](/uploads/allimg/090616/02113V132-0_lit.jpg)
