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T、B淋巴细胞功能测定方法

时间:2012-03-17 01:25|来源:实验室前沿| | 分享|点击:


淋巴细胞功能测定可分为体内试验和体外试验。体内主要是进行迟发型超敏反应,借此间接了解淋巴细胞对抗原、半抗原或有丝分裂原的反应;体外试验方法包括淋巴细胞对抗原或有丝分裂原的增殖试验、细胞毒试验以及其分泌产物功能的测定(淋巴因子的测定见第八章)。淋巴细胞功能测定不仅能够了解机体免疫功能状态,而且是免疫缺陷病诊断的主要依据,也有助于探讨某些疾病的发病机理、疗效判断、推断转归。

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一、T、B淋巴细胞增殖反应
    测定淋巴细胞体外增殖反应是检测细胞免疫功能的常用方法。刺激淋巴细胞增殖的物质可分为二大类:①非特异性刺激物:如植物血凝素(phytohemagglutinin,PHA)、刀豆蛋白A(concanavalin A,ConA)、美洲商陆(pokeweed mitogen,PWM)、佛波酯(PMA)等有丝分裂原;能产生A蛋白的葡萄球菌(SAC)、EB病毒、链球菌溶血毒素S、细菌脂多糖(LPS)等微生物及其代谢产物;胃蛋白酶、胰蛋白酶等蛋白物质;抗CD3、CD2、IgM等细胞表面标志的抗体以及某些淋巴因子等;②特异性刺激物:主要是特异性抗原物质,包括各种可溶性抗原和细胞表面抗原。不同的刺激因子可刺激不同的淋巴细胞分化增殖,因而可反映不同淋巴细胞群体的免疫功能。体外测定淋巴细胞增殖反应常采用同位素掺入法和MTT比色法。
   
二、混合淋巴细胞培养
    混合淋巴细胞培养(mixed lymphocyte culture,MLC)或称混合淋巴细胞反应(mixed lymphocyte reaction,MLR)是来源于两个个体的淋巴细胞在体外混合培养时,由于细胞表面HLA-Ⅱ类抗原型别不同,可相互刺激对方淋巴细胞转化(称为双向MLC),并产生多种淋巴因子,促进NK、CTL、LAK等杀伤细胞活性。若将刺激的一方淋巴细胞先用丝裂霉素C(mitomycine C)或放射线照射处理,使该细胞失去增殖能力,但仍保持刺激对方淋巴细胞增殖的试验称为单向MLC。MLC反应可通过3H-TdR掺入法或MTT法等方法检测。
MLC主要用于移植前组织配型,以测定供、受者间组织相容性抗原的相容程度。也是免疫调节研究中的实验模型。 
 
三、细胞毒性T细胞胞毒功能测定
细胞毒性T细胞(CTL)是特异性细胞免疫的主要效应细胞之一,它可通过与靶细胞的直接接触,特异而高效地杀伤靶细胞。其主要生物学作用为参与抗病毒免疫、抗肿瘤免疫和移植排斥反应。
 
四、B细胞功能的测定
    B细胞在抗原或多克隆刺激剂丝裂原的诱导下分化为浆细胞,产生抗体。因此,实验室多采用检测多克隆抗体的产生来测定B细胞产生和分泌抗体的能力。
测定多克隆抗体产生的方法主要有细胞浆(内)Ig的检测和细胞外分泌抗体的检测,包括反向空斑形成法、酶联免疫斑点法及ELISA等。其中ELISA法是一种简便、特异、敏感的非放射性试验方法,广泛用于血清组织标本及细胞培养上清液中Ig含量的检测。
 
五、LAK/TIL细胞的活性测定
    淋巴因子激活的细胞毒性细胞(lymphokine activated killer,LAK)和肿瘤浸润性淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocyte,TIL)在机体的免疫防御中起着十分重要的作用,特别是在肿瘤免疫过继疗法中具有重要的应用前景,其活性的检测对于评价机体的免疫状态具有重要的意义。
Tags:测定,方法,功能,淋巴细胞,B,T,
责任编辑:丁军

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