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HIV-1分离的方法及程序

时间:2011-09-03 00:12|来源:实验室前沿| 分享|点击:


一般采用靶细胞(HIV阴性者外周血淋巴细胞,PBMC)与受检者标本(PBMC、全血、血浆、精液及其他体液)共培养的方法,最常用的方法是PBMC共培养。 内容来自实验室前沿网站

5.1 样本:首选新鲜抗凝全血,也可以使用血浆、精液及其他体液。
5.2 靶细胞制备:取HIV阴性者的抗凝全血,采用密度梯度离心的方法分离PBMC,并在含有适量天然白介素-2(IL-2)和植物血凝素(PHA-P)的培养基中培养3天,使淋巴细胞由静止状态充分活化。
5.3 建立共培养:将靶细胞与待检样本混合,在合适的条件下培养,培养过程中适时换液或补加新鲜靶细胞,维持培养28天。
5.4 监测病毒生长:定时取适量培养上清液,检测HIV-1P24抗原或逆转录酶活性。也可定期观察细胞的形态,看有无HIV特征性的合胞体或其他细胞病变。
5.5 病毒鉴定:取培养上清液提取纯化RNA,或取共培养的PBMC提取纯化基因组DNA,用PCR方法扩增HIV-1特征性基因片段,对扩增阳性的片段进行基因序列测定。
5.6 判定结果和解释
5.6.1 培养上清液P24抗原或逆转录酶连续2次呈阳性反应、并有P24抗原含量/逆转录酶活性升高,或同时出现HIV特征性细胞病变,并经鉴定为HIV 基因序列,判为HIV-1分离阳性。
5.6.2 培养上清液P24抗原或逆转录酶始终为阴性,判为HIV-1分离阴性。
5.6.3 HIV-1分离培养阳性可以确证为HIV-1感染,分离培养阴性不能排除HIV-1感染。
Tags:程序,方法,分离,培养,细胞,PBMC,HIV-1,阴性,H
责任编辑:何辉

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