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产气荚膜梭菌病分离培养的9种培养基技术

时间:2010-10-27 07:38|来源:实验室前沿| 分享|点击:


①硫乙醇酸钠增菌培养基。胰消化酪蛋白15g,L-胱氨酸0.5g,酵母浸膏5g,氯化钠2.5g,硫乙醇酸钠0.5g,刃天青0.001g,琼脂0.75g蒸馏水1000ml。加热融化后,调pH7.2~7.4,分装于带螺帽试管成半固体高层,121℃高压灭菌15min。贮于4~C冰箱备用。检样接种后,置46~C水浴中培养4~6h。

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②BCP培养基。2号血琼脂基础(OxoidCM271)40明显浑浊及产气者为阳性。可继续进行平板分离。肌醇10g,甘露醇10g,丙酮酸钠1g,1%溴甲酚紫乙醇溶液4ml,蒸馏水1000ml。加热融化,调pH7.2-7.4,121℃高压灭菌15min。冷至50~C时加入50%的无菌卵黄盐水10ml,倾注平板,置4~C冰箱可保存一个月以上。检样接种后,先于37~C预培养2~4h,继之在43~45℃培养过夜。产生卵磷脂酶及对肌醇发酵,可定为产气荚膜梭菌。培养基中若加入新霉素100Fg/ml,环丝氨酸400big/ml,多黏菌素101U/ml,可增加其选择性。
 
③结晶紫-血琼脂。明胶基础琼脂500ml,加热融化,冷至50~C时,加1%结晶紫水溶液0.2ml,无菌脱纤牛血25ml,摇匀,倾注平板,贮于4~C冰箱备用。
 
④改良m-CP培养基。胰胨3g,酵母浸膏2g,蔗糖0.5g,盐酸胱氨酸0.1g,硫酸镁0.01g,溴甲酚紫0.004g,琼脂1.5g,蒸馏水90ml。121℃高压灭菌15min,冷却至50~C时,加入滤过灭菌的2%二磷酸酚酞2ml,4.5%氯化铁溶液o.2ml,以及抗菌混合液8ml(内含环丝氨酸40mg,多黏菌素2.5mg,夕-D-糖苷60mg)。检样接种后,在45℃培养18h,产气荚膜梭菌菌落为不透明,乳黄色,如将平板覆于氨气上,则变为红色或暗红色菌落。
 
⑤铁-亚硫酸盐琼脂。胰胨10g,亚硫酸钠1g,琼脂20g,硫乙醇酸钠5g,蒸馏水1000ml。121℃高压灭菌后,加入10ml 5%的柠檬酸铁,摇匀,倾注平板。不必调pH。
 
⑥TSC培养基。为胰胨-亚硫酸盐环丝氨酸培养基。胰胨15g,大豆蛋白胨5g,酵母浸膏5g,偏亚硫酸钠1g,柠檬酸铁铵1g,琼脂20g,蒸馏水1000ml。加热溶解,调pH7.2~7.4,121℃高压灭菌10min。加入滤过灭菌的4%D-环丝氨酸10mi(终浓度为400Fg/m1)。待其冷却至50~C时,加无菌50%蛋黄盐水乳剂80ml,摇匀,倾注平板。供涂皿培养用的须烘干表面水湿;供层叠用的TSC琼脂可不加蛋黄液。
 
⑦SPS琼脂。为亚硫酸盐-多黏菌素-磺胺嘧啶琼脂。胰蛋白胨15g,柠檬酸铁0.5g,琼脂20g,蒸馏水1000ml。加热煮沸1~2min溶解,121℃高压灭菌15min,最终pH7.2。每升灭菌培养基加入下面的过滤除菌的溶液:100g/m1亚硫酸钠溶液(NaSOa·7H:O)5ml;1.2g/L多黏菌素B硫酸盐溶液10ml;12rng/m1磺胺嘧啶钠溶液10ml。产气荚膜梭菌在此培养基上生长成黑色菌落。
 
⑧PY培养基液。多胨20g,酵母浸膏5g,NaCl 5g;蒸馏水1000ml,pH6.6-7.0。以9ml量分装试管。121℃高压灭菌15rain。用前在水浴中加热,加入滤过灭菌的10%蔗糖lml。
 
⑨促芽孢培养基。酵母浸膏3g,蛋白胨10g,可溶性淀粉3g,Na2HP04·7H:07g,KH2PO,(无水)1.5g,MgSO,0.1g,硫乙醇酸钠1g,蒸馏水1000ml。pH7.6,121℃高压灭菌15rain。
Tags:培养,技术,分离,
责任编辑:何辉

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