采样。应根据疾病发生的类型进行样品的采集。对于急性呼吸道型的病鸡，应采取气管拭子或采取剧扑杀的病鸡的支气管和肺组织，将病料放在含有青霉素(100001U／ML)和链霉素(10mg／m1)的运输培养基内，置冰盒内发送到实验室。对于肾型和产蛋下降型的病鸡，应采取发病鸡的病肾或输卵管分离病毒，但从大肠尤其是盲肠扁桃体分离病毒成功率最高。用含抗生素的培养液将病料制成组织悬液(200g儿)，经低速离心，取上清液，以备用于鸡胚或气管环组织培养(TOCs)接种。
本文来自实验室前沿
病毒的分离培养。鸡胚和TOCs常用来滴定病毒滴度或用于病毒的初步分离。由于初步分离的病毒必须经鸡胚传代后，才能在细胞培养物上产生可见的细胞病变(CPE)，所以通常不使用细胞培养物作为病毒初步分离的材料。
用于病毒培养的鸡胚必须是来自无IB感染的鸡和未经免疫的鸡群所产的蛋，最好用SPF鸡胚。取病料悬液，接种于9～11日龄的鸡胚尿囊腔内，每胚o．1～o．2ml。每天照蛋，24h内死亡的鸡胚弃去，接种一周后观察结果。初次分离常不能使鸡胚产生可见的病变。收集接种后5～?天的鸡胚尿囊液，将所有尿囊液混合，用含抗菌素的稀释液稀释5—10倍，继续在鸡胚内盲传。分离毒株通常在盲传2～3代后，出现可见的病变，并随着传代次数的增加，鸡胚的死亡率不断增加。含毒尿囊液置一60~C以下可长期保存，也可以冻干保存于4~C。
用20日龄的鸡胚制备TOCs，可直接用于野外病毒的分离。气管环厚约0.5～1.0mm，培养于细胞培养基中，置37~C的培养，病毒接种后24—48h可见TOCs纤毛运动停滞。
病毒的鉴定。
病原检测 鸡胚病毒中和试验(VN)和免疫扩散试验均可用于病毒的鉴定，也可用免疫荧光试验检测感染鸡胚绒毛尿囊膜中的病毒，用经浓缩的含毒尿囊液和TOCs培养液直接负染，可在电镜下观察特征性的冠状病毒颗粒。用聚合酶链反应(PCR)和核酸探针可以检测尿囊液中的病毒，也可以用免疫荧光试验直接检测TOCs中的病毒。
血清型鉴定 IBV的抗原性和生物学特性极易发生变异，所以目前仍没有一个可靠的血清型鉴定方法。但病毒血清型的鉴定对疫苗的研制是非常重要的，因为不同血清型的病毒相互交叉保护能力很差，因此，在一个区域内适用的疫苗，可能仅有部分保护甚至完全不能保护另一区域的鸡群免受变异毒株的侵袭。制备疫苗的毒株要求及时地更换，以保障疫苗的免疫效果。用于血清型鉴定的试验方法包括用鸡胚、TOCs或细胞进行的VN试验，用荧光标记的中和试验。用早期感染的血清作HI试验，也是鉴定IBV的好方法。
以单克隆抗体进行的酶联免疫吸附试验(ELISA)，已用于IBV抗原性的分析和研究。单克隆抗体与病毒的生物学特性和抗原性有着密切的关系，可以为IBV血清型的鉴定提供一种好的方法。
![嗜中性粒细胞来袭时的微细胞之战[图]](/uploads/allimg/090616/02113V132-0_lit.jpg)
