制备前需要的器材及试剂
LB+Amp
LB+Amp/Glu[LB ，50ug/ml Amp，l％葡萄糖]
IPTG
M13K07辅助噬菌体(Stratagene)
PEG 8000(Sigma)
NaCl
TBS
SW40异质同晶聚合物管(Beckman)
制备的方法
1．将含有单克隆噬菌粒的菌落接种到10ul LB+Amp/Glu中，37℃过夜培养(在lac启动 子的控制下，葡萄糖能抑制pⅧ基因的表达)。
2．用500ml LB+Amp稀释过夜培养液，使之OD600＝0．05；并在37℃下用2L烧瓶剧烈 振荡培养(至少300r/min)，直到OD600＝0．25。
3．37℃极温和搅动孵育15分钟。加入IPTG(终浓度为0．1mmol/L)诱导源自lac启动 ·子的pⅧ表达，并用辅助噬菌体M13K07(mol＝30)进行超感染。混合并在37℃下静置15分钟感染。37℃剧烈振荡孵育培养物5小时。
4．将细菌/噬菌体上清在4℃5000r/min离心30分钟，回收上清液。
5．加PEG 8000和NaCl溶液(其终浓度分别为4％和0．5mol/L)沉淀噬菌体颗粒，4℃冰上4小时。
6．4℃5000r/min离心40分钟回收噬菌体沉淀，并用1/10原体积的TBS重悬。
7．70℃水浴孵育噬菌体上清30分钟，使污染的细菌蛋白变性；再4℃10000r/min离心30分钟除之。
8．将PEG 8000/NaCl加入所得到的上清，再次沉淀噬茵体，4℃冰上孵育2小时。
9．4℃10000r/min离心30分钟， 用10ml PBS重悬噬菌体沉淀。 以8000r/min再次离心15分钟，以去除不溶物质。
10．在LB+Amp平板上滴定噬菌体TU值。
![嗜中性粒细胞来袭时的微细胞之战[图]](/uploads/allimg/090616/02113V132-0_lit.jpg)
