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检测金黄色葡萄球菌的PCR技术

时间:2009-12-21 15:47|来源:实验室前沿| | 分享|点击:


      金黄色葡萄球菌(以下简称金葡菌)在食品污染病例中占据十分重要的位置,同时也是医院临床感染导致肺炎及伤口感染的主要病原菌,占医院感染病例的l0%;而抗生素的广泛应用导致了耐药菌株尤其是耐甲氧西林葡萄球菌的大量出现,使其成为与艾滋病、乙型肝炎并列的世界三大感染顽疾。因此对金葡菌的检测研究一直以来备受重视,其研究方向主要集中在两个方面:耐甲氧西林金葡菌的检测及产致病性毒素金葡菌的检测。传统的检测方法先做选择性培养,然后做鉴定试验,包括血浆凝固酶试验、免疫学试验、耐热核酸酶活性试验及各种糖、醇发酵试验及新生霉素敏感试验等,其优点是操作简便,所需设备简单,但一般都存在耗时长、灵敏性差等缺点,且Baird-Parker选择性培养时无法识别受热处理而损伤的菌体;凝固酶试验及耐热核酸酶试验与传统的经典方法有很好的对应性,但一些凝固酶及耐热核酸酶阴性菌同样可以产生致病性毒素,或其他少数葡萄球菌也可以产生耐热核酸酶或相似酶而导致假阳性,一定程度上限制了酶活性检测的应用;成品凝集检测试剂盒虽有很好的特异性,但在实际样品的检测时灵敏性差异明显,且成本较高。随着分子生物学技术的广泛应用,对金葡菌的检测也从传统方法过渡到以PCR及杂交探针、基因芯片为主的现代技术手段,从基因水平更准确、灵敏地检测病原菌的存在。 本文来自织梦

 
    聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)是1985年由Mullis等创建的一种快速扩增特异目标基因的技术,其基本步骤包括变性(denature)、退火(annealing)和延伸(extension),即模板双链DNA高温变性,引物与单链模板低温退火,单核苷酸dNTP从弓I物3‘端延长子代DNA。PCR技术不仅具有高特异性、灵敏性及操作简便等优点,而且因其可以检测常规方法无法检测的、受热处理损伤的细胞,更有力地表明致病菌的潜在威胁性而被广泛应用。对于金葡菌而言,PCR技术主要应用于两个系列基因的检测,即MRSA相关基因及产毒素基因的检测,同时也不断发现一些种属特异性靶基因。
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责任编辑:何辉

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