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大肠杆菌的PCR技术

时间:2011-01-09 02:26|来源:实验室前沿| | 分享|点击:


大肠杆菌的PCR技术

中美学者合作,对3.3kb的DNA探针进行了序列分析,发现其编码EHEC溶血素AB基因,此基因与已发表的泌尿道大肠杆菌等的溶血素在DNA序列和氨基酸序列有所不同,是EHEC特有的,并以此为基础,发展了PCR检测方法。此法特异、敏感、快速,可在3—4h左右出结果。

本文来自织梦

 
    Brian等针对VT基因A亚单位分别设计出SLTl引物和SLT2引物和杂交用的寡核苷酸探针。两对引物可同时扩增EHEC的SLTl和SLT2,先后扩增出370bp和283bp的产物,并用放射性探针予以证实,而非EHEC扩增为阴性。这种方法还可检测小到一个细菌的基因组,并可用来检测大便中的DNA而无需预先分离和培养细菌。
 
    另外,Fratamico等还设计了一种多重PCR方法,即利用EHEC所特有的eoe基因、SLTl和SLT2、60Mμ质粒的保守序列设计的多重引物,成功地同时扩增得到了1087bp(eaeA)、227bp和224bp(SLTl和SLT2)、166bp(质粒),这种多重PCR方法灵敏、特异和快速,可用来诊断产SLT的0157所致的疾病,也可对粪便标本的增菌培养物直接进行扩增,结果比传统的SMAC漏检率减少。Venkateswaran等还用复合PCR-简单过滤技术检测出牛肉中含有的肠出血性大肠杆菌0157;H7及其毒素
Tags:技术,EHEC,SLTl,序列,SLT2,基因,检测,PCR
责任编辑:何辉

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