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大肠杆菌的DNA基因探针技术基因芯片检测技术

时间:2011-06-13 01:50|来源:实验室前沿| | 分享|点击:


   主要有EHEC毒性质粒、VTl、VT2、EAE基因探针。Hudk等使用EHEC 0157:H7质粒的限制性片段VPMl探针进行研究,发现所有的产毒性大肠杆菌和非大肠杆菌均为阴性,50株产Vero毒素的非0157仅5株出现阳性反应,而提高反应温度至45℃,5例假阳性可转变为2例阳性、3例痕迹反应。另一种探针以编码葡萄糖醛酸酶的3tidA等位基因作探针,特异性也较高。 本文来自织梦

    EHEC除0157:H7外,还包括026:H11等血清型的部分菌落,用血清学方法不适于大量的流行病学调查。为解决这个问题,根据质粒和致病性的设想,徐建国等发展了EHEC特性DNA探针,该探针已被国际公认,成为鉴定EHEC的关键指标,敏感性和特异性高达99%以上。
 
    EHEC的VTl和VT2的特异性基因已被克隆,并制成VTl和VT2探针,这种探针在美国公共卫生中心实验室已广为使用,可在混合菌落中检出1%阳性菌落,其敏感性与测定粪便标本中VT方法相似,两种方法亦可同时使用,测定EHEC 0157:H7时比SMAC更敏感。Cordovez等从溶血性尿毒综合征患儿中分离出来的EHEC均与质粒探针、VTl探针、VT2探针杂交。
 
    EHEC细菌染色体上的eae基因也被克隆,经P标记成EAE探针,用斑点杂交法检查细菌的eae基因。Schmidt等用EAE基因探针研究237份腹泻病人标本与对照组237份标本后认为,EAE基因探针的特异性不如SLT基因探针。
 
    基因芯片技术是近年来分子生物学及医学诊断技术的重要进展,该技术是通过把巨大数量墓押塑账帷㈦暮塑账峄騝DNA固定在一块面积很小的硅片、玻片或尼龙膜上而构成基因芯片。它主要是基于近年来的一种全新的DNA测序方法之一(杂交测序法)应运而生的。由于该技术同时将大量的探针固定于支持物上,所以可以一次性对大量序列行检测和基因分析,解决了传统的核酸印迹杂交操作复杂、操作序列数量少等缺点。基因芯片技术的突出特点在于其高度的并行性、多样化、微型化和自动化。与传统方法相比,生物芯片在疾病诊断方面具有独特的优势,它可以在一张芯片同时对多个患者进行多种疾病的检测。仅用极小量的样品,在短时间内即可为医务人员提供大量的疾病诊断信息。有的实验室难题在高能量的检测中可以得到解决,如消化道致病菌检测等。
Tags:基因,芯片,技术,探针,EHEC,方法,检测,EAE,杂交,
责任编辑:何辉

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