PCR是极为重要的DNA增殖技术，应用层面非常广，其中包括了核酸探针的制备。如果一段DNA已经被次选殖至载体上，要以PCR扩增这段DNA时，可根据质体multiple cloning sites两边的序列，选用适当的核酸引子 (universal primers) 进行扩增反应；比较常用的引子包括SP6, T3 与T7 promoter primer, M13/pUCforward与reverse primers等；若有特殊考量，也可以使用序列专一性核酸引子对。进行PCR反应时若同时添加 [α-32P]dNTP或DIG-11-dUTP，所增殖的DNA即被32P或DIG所标定，所以PCR是制备核酸探针非常便捷好用的方法。 本文来自实验室前沿
仪器用具：微量离心机；PCR 反应器 sysqy.com
药品试剂：
模版DNA： pBlueGus 质体DNA (~50 pg)
核酸引子对： T3 promoter primer 与T7 promoter primer (各2 μM)
矿物油 (是否需要视PCR反应器机型而定)
PCR DIG probe synthesis kit (Roche), 内含：
Taq DNA polymerase (Expand High Fidelity, 3.5 U/μL)
10×PCR DIG probe synthesis mix (2 mM dATP, dCTP, dGTP, 1.9 mM dTTP,及0.1 mM DIG-11-dUTP, pH 7.0)
Expand high fidelity buffer with MgCl2 (10×)
方法步骤：
以下反应条件主要参照PCR DIG probe synthesis kit 制造厂商所提供的产品说明。
1) 取一支0.5 mL微量离心管，依下表逐一加入各项试剂 (单位 μL)：
2) 以手指头轻弹管壁使各项试剂混合均匀。
3) 短暂离心后，徐徐加入100 μL 矿物油。
◆ 有些PCR 反应器不需使用矿物油。
4) 在PCR 反应器上设定PCR 反应条件：Denaturation： 94℃/10 min
扩增反应：
30 循环的 [94℃/45 s → 55℃/1 min → 72℃/2 min]
最后的elongation step：72℃/10 min
5) 将微量离心管移至反应器上，并开始进行PCR 反应。
6) 反应完成后，以微量移液器吸出矿物油，并取出5 μL PCR 反应产物，进行洋菜胶体电泳分析。
