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血清尿素氮(BUN)谷氨酸脱氢酶测定法

时间:2009-07-02 17:10|来源:实验室前沿| 分享|点击:


1.   实验原理

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脲酶-谷氨酸脱氢酶(Urease-GLDH)连续监测法。尿素被脲酶水解产氨。在NADH的存在下,氨和α-酮戊二酸反应生成谷氨酸,NADH同时被氧化成NADNADH的减少和样品中尿素浓度成正比。本法是连续监测法。

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             脲酶 实验室前沿,了解实验室动态

尿素 + 2H2O            2 NH4 + 2 HCO3 实验室前沿,了解实验室动态

                      谷氨酸脱氢酶 sysqy.com

NH4+α-酮戊二酸+NADH              L-谷氨酸+NAD+H2O

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2 标本: copyright sysqy.com

2.1 病人准备:血清无特殊要求。要留取24小时尿样。

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2.2 类型:血清、血浆(不可使用肝素铵)、新鲜尿液。无溶血和凝块的血清,如果必须使用血浆,建议使用无铵离子的抗凝血剂,如EDTA和肝素钠。用新鲜尿液作样品时,用蒸馏水作1:100稀释。 copyright sysqy.com

3. 标本存放:血清或血浆稳定性:425保存可稳定7天;-20保存可稳定1年。尿液稳定性:2025保存可稳定2天;48保存可稳定7天;-20保存可稳定1个月。

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4. 标本运输:常温条件下保存运输。

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5. 标本拒收标准:细菌污染的标本。

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6. 实验材料 sysqy.com

6.1 试剂:申能尿素测定试剂盒(142 3107170 1 试剂16×64ml+试剂2 6×16ml

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6.1.1 试剂组成 内容来自实验室前沿网站

试剂1

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Tris缓冲液     pH7.8     120mmol/L 实验室前沿,了解实验室动态

α-酮戊二酸               7mmol/L

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ADP                    0.6mmol/L

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谷氨酸脱氢酶            1000U/L

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脲酶                   6000U/L

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试剂2

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NADH                 0.25mmol/L

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6.1.2 试剂准备:试剂为即用式。

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6.1.3 试剂稳定性与贮存 copyright sysqy.com

试剂保存于225℃,若无污染,可稳定至失效期。试剂不可冰冻。 sysqy.com

6.1.4 变质指示:当试剂有看得见的微生物生长,有浊度,或者未开盖的液体有沉淀时,表明试剂已变质,不能继续使用。 copyright sysqy.com

6.1.5 注意事项:此试剂为体外诊断用。不要入口,吞下有害。保护剂为叠氮钠,避免接触皮肤及粘膜,与下水管中的铅反应形成爆炸性化合物,即使只含有少量的叠氮钠,如果排向下水道请用大量的水冲洗。应采取必要的预防措施使用试剂。

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6.2 校准品:使用DiaSys公司提供的TruCal U校准品对自动分析仪进行校准,具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。 sysqy.com

6.3 质控品:具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。 sysqy.com

7. 仪器:奥林巴斯AU1000生化分析仪 copyright sysqy.com

8. 操作步骤

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8.1 项目基本参数:参见生化检验奥林巴斯AU1000生化分析仪项目测定参数.SOP文件 sysqy.com

8.2 仪器操作步骤:参见生化检验奥林巴斯AU1000生化分析仪操作规程.SOP文件

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9. 检验结果的判断与分析 copyright sysqy.com

10. 质量控制:在每一批标本中都应把非定值血清水平III质控做为未知标本进行分析,以2S为质控警告限,3S为失控限,绘制质控图,判断是否在控。质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。 sysqy.com

11. 计算方法:TruCal U复合校准品尿素氮校准值校准仪器后,在病人结果可报告范围内,仪器直接报告可靠的检测结果,以mmol/L报告。将尿素量乘以系数2.8可以换算成尿素氮量;将尿素氮量乘以系数0.357可以换算成尿素量。手工测定计算方法为: copyright sysqy.com

                     Au

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尿素氮浓度(mmol/L)=       ×校准液浓度 实验室前沿,了解实验室动态

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12. 参考值范围

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血清/血浆[1]

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成人(mmol/L

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全球           2.87.2

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女性<50      2.66.7 sysqy.com

女性>50      3.57.5

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男性<50      3.27.3

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男性>50      3.09.2

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儿童 copyright sysqy.com

13         1.86.0

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413        2.56.0 内容来自实验室前沿网站

1419       2.97.5

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尿素/肌酐比率[1]       2540[(mmol/L)/(mmol/L)]

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尿液[2]              0.430.72mol/d

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(注:各实验室应有自己的参考范围。)参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验,每个实验室应建立自己的参考值。 实验室前沿,了解实验室动态

13. 临床意义:尿素是蛋白质分解代谢的含氮终产物。高尿素血症或氮血症表现为血液中尿素水平升高。鉴别肾前和肾后氮血症时可以同时检测尿素和肌酐。因脱水、蛋白质代谢增加、皮质醇治疗或肾脏灌注减少等引起的肾前氮血症,表现为尿素水平升高而肌酐水平正常。由泌尿管道阻塞引起的肾后氮血症,表现为尿素和肌酐水平都升高,但肌酐升高程度较小。发生肾病时,肾小球滤过作用明显下降或蛋白质摄入量大于200 g/天都会导致尿素浓度升高。

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尿素氮的检测用于诊断和治疗某些肾脏疾病和代谢紊乱。

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尿素氮大约占血液中非蛋白氮的75%。它通过肝脏中的氨进行合成,是蛋白质脱氨作用的产物。通过肾小球从血液中过滤尿素到尿中,是消除体内多余氮的主要方法。 sysqy.com

血液尿素氮(BUN)水平是肾功能以及肾前状态和肾后状态的度量标准,肾前因素引起的BUN的升高包括心脏代偿失调,缺水或增加的蛋白质分解代谢。水平增加的肾脏因素有急性肾小球肾炎,慢性肾炎,多囊肾,肾纤维化和肾小管坏死。任何类型的泌尿道的梗塞受阻是BUN水平升高的肾后因素1。肾小球清除尿素和肌酸酐,但是,尿素随后部分地被肾小管重吸收,然而肌酸酐却不会。因此,血清尿素氮和血清肌酸酐测定经常同时用于肾功能的不同诊断中。

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14. 操作性能 sysqy.com

14.1 线性范围:0.350mmol/L

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14.2 精密度:精密度的评估是根据NCCLS推荐的标准方法,AU1000批内不精密度小于3%,总不精密度小于5%。用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。 实验室前沿,了解实验室动态

批内精密度

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n=20

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s

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CV 实验室前沿,了解实验室动态

(%)

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天间精密度 本文来自实验室前沿

n=20

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(mmol/L) 实验室前沿,了解实验室动态

s sysqy.com

(mmol/L)

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CV 内容来自实验室前沿网站

(%)

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样品1 copyright sysqy.com

4.96

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0.27 实验室前沿,了解实验室动态

5.41 本文来自实验室前沿

样品1 本文来自实验室前沿

5.23

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0.30

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5.79 copyright sysqy.com

样品2

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8.77 实验室前沿,了解实验室动态

0.27

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3.13 copyright sysqy.com

样品2

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8.77

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0.34

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3.87

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样品3

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19.48 内容来自实验室前沿网站

0.25 copyright sysqy.com

1.27

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样品3

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19.48

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0.55

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2.86 内容来自实验室前沿网站

14.3 方法学比较:本公司的试剂(y)与某商品化试剂(x),同时对68个样品进行Urea检测,将检测结果作方法学比较,其统计结果如下:y=0.99x+0.176mmol/Lr=0.999 实验室前沿,了解实验室动态

14.4 灵敏度:本试剂的检测限为0.3mmol/L 本文来自实验室前沿

14.5 病人结果可报告范围:0.350mmol/L 实验室前沿,了解实验室动态

15. 超出范围结果处理:本法线性上限血清/血浆为50mmol/L、尿液为5mol/L如样品测定值超过上限时,应将样品用0.9%的氯化钠溶液作1:2稀释,重新测定,结果乘以3

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16. 病危报警值的处理:当尿素氮测定值>36mmol/L时,在经过复查等确认手段处理后应及时向临床主管医生汇报。 sysqy.com

17. 方法局限性

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17.1 本法线性上限血清/血浆为50mmol/L、尿液为5mol/L。如样品测定值超过上限时,应将样品用0.9%的氯化钠溶液作1:2稀释,重新测定,结果乘以3

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17.2 干扰物质:当样品中抗坏血酸浓度£1704mmol/L,胆红素浓度£684mmol/L,血红蛋白浓度£5.00g/L,甘油三酯浓度£22.6mmol/L时没有观察到干扰。铵离子会影响检测结果,因此收集血浆时勿用肝素铵抗凝!

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18. 补救措施:当仪器发生故障时,迅速联系仪器厂家进行维修。 sysqy.com

19. 参考文献  实验室前沿,了解实验室动态

1.   Thomas L, editor. Clinical laboratory diagnostics. 1st ed. Frankfurt: TH-Books Verlagsgesellschaft; 1998.p.374-7.

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2.   Burtis CA, Ashwood ER. editors. Tietz textbook of clinical chemistry. 3rd ed. Philadelphia: W. B. Saunders Company; 1999.p.1838.

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3. Talk H, Schubert GE. Enzymatische Harstoff bestimmung in Blut und Serum im optischen Test nach Warburg (Enzymatic determination of urea in blood and serum with the optical test according to Warburg). Klin Wschr 1965;43:174-5.

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20. 其他:仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集后按《检验科废物处置管理规定》执行。 内容来自实验室前沿网站

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