AFLP技术是一项新的分子标记技术,是基于PCR技术扩增基因组DNA限制性片段,基因组DNA先用限制性内切酶切割,然后将双链接头连接到DNA片段的末端,接头序列和相邻的限制性位点序列,作为引物结合位点。限制性片段用二种酶切割产生,一种是罕见切割酶,一种是常用切割酶。它结合了RFLP和PCR技术特点,具有RFLP技术的可靠性和PCR技术的高效性。由于AFLP扩增可使某一品种出现特定的DNA谱带,而在另一品种中可能无此谱带产生,因此,这种通过引物诱导及DNA扩增后得到的DNA多态性可做为一种分子标记。
AFLP可在一次单个反应中检测到大量的片段。以说AFLP技术是一种新的而且有很大功能的DNA指纹技术。
AFLP反应流程:
AFLP反应程序主要包括模板DNA制备,酶切片段扩增及凝胶电泳分析这3个基本步骤。各步骤具体的过程有:
首先要制备高分子量(HMW)基因组DNA,选择6个碱基识别位点的限制性内切酶(通常是EcoRI或PstI或SacI)。
酶切后的限制性片段在T4连接酶的作用下与特定的接头相连接,形成带有接头的特异性片段。
DNA片段的预扩增。
在Taq聚合酶的作用下,完成AFLP的选择性扩增。
PCR产物变性后在含尿素的聚丙烯酰胺变性胶上电泳。
实验室前沿,了解实验室动态
多态性比较分析,特异片段回收克隆分析。
本文来自实验室前沿