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AFLP技术原理

时间:2010-10-13 03:01|来源:实验室前沿| 分享|点击:


AFLP技术是一项新的分子标记技术,是基于PCR技术扩增基因组DNA限制性片段,基因组DNA先用限制性内切酶切割,然后将双链接头连接到DNA片段的末端,接头序列和相邻的限制性位点序列,作为引物结合位点。限制性片段用二种酶切割产生,一种是罕见切割酶,一种是常用切割酶。它结合了RFLP和PCR技术特点,具有RFLP技术的可靠性和PCR技术的高效性。由于AFLP扩增可使某一品种出现特定的DNA谱带,而在另一品种中可能无此谱带产生,因此,这种通过引物诱导及DNA扩增后得到的DNA多态性可做为一种分子标记。

AFLP可在一次单个反应中检测到大量的片段。以说AFLP技术是一种新的而且有很大功能的DNA指纹技术。

AFLP反应流程:

AFLP反应程序主要包括模板DNA制备,酶切片段扩增及凝胶电泳分析这3个基本步骤。各步骤具体的过程有:

首先要制备高分子量(HMW)基因组DNA,选择6个碱基识别位点的限制性内切酶(通常是EcoRI或PstI或SacI)。

酶切后的限制性片段在T4连接酶的作用下与特定的接头相连接,形成带有接头的特异性片段。

DNA片段的预扩增。

在Taq聚合酶的作用下,完成AFLP的选择性扩增。

PCR产物变性后在含尿素的聚丙烯酰胺变性胶上电泳。

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多态性比较分析,特异片段回收克隆分析。

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Tags:原理,技术,DNA,片段,AFLP,限制性,切割,接头,PC
责任编辑:何辉

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