5.12.2.2 热盖的清洁
热盖每月进行一次清洁,如有需要随时进行。
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a)运行
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b)逆时针旋转PE 5700光源检测器顶部旋钮。向后推PE 5700光源检测器至滑轨距离的大约1/3处。
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c)PE 5700光源检测器滑轨上有缺口。从这些缺口垂直抬起PE 5700光源检测器,小心侧放于仪器顶盖上。不要从仪器取走热盖。
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d)用经过浓度≥95%乙醇湿润的镜头纸或脱脂棉球清洁加热盖,待干。
e)将PE 5700光源检测器重新安装回滑轨。
5.12.2.3 PE 5700光路系统的维护
5.12.2.3.1 调准ROI参照条
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调准ROI参照条在仪器更换卤素灯、仪器定期校准或仪器维修后进行。不得由一般实验人员进行该项操作。
a)PCR仪样品槽中放入荧光检测板。
b)将PE 5700光源检测器向前拖动盖住样品槽,并旋紧。
c)从Start菜单选择运行PE 5700 SDS管理软件。
d)积分时间从512ms开始,用位置调整点,调节ROI的高度与右边线。
e)逐渐增加积分时间,直到可以看到至少四个块(约4096ms)。
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f)调整最左侧位置调整点。
g)减少积分时间到1024ms,调整上方与底部的位置调整点。
h)减少积分时间以便最右侧块可见但未饱和(约512ms),调节最右侧位置调整点。如有需要用右上角拖动点调整图像的倾斜度(以左上角为中心旋转)。
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i)调节后的参照条宽度必须在ROI参照块间有小空隙。
5.12.2.3.2 校正ROI光路
ROI光路校正每月进行一次,以便确信结果仍然是优化的。
a)在PCR仪样品槽中放入荧光检测板。
b)将PE 5700光源检测器向前拖动盖住样品槽,并旋紧。
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c)从Start菜单选择运行PE 5700 SDS管理软件。
d)点选Show ROI复选框。每个样品孔周围出现一蓝色椭圆圈。
e)点选Show Saturation复选框。
f)设定积分时间为1024ms;打开卤素灯和光闸。
g)点击LIVE按钮获取图像,然后在任何地方左击停止。获取中等程度未饱和图像(无红色图像)。
h)从Edit菜单中选择Calibrate ROIs每个孔都会选取合适的ROI,确定96孔都被蓝色椭圆圈正确界定。
i)图像太亮太暗都会出现错误信息,相应增加或减少积分时间,并重复上述第8步直到无错误信息出现。
j)检查孔ROI位置,所有孔信息都应包含在96个ROI椭圆圈中。如果没有,重复8和9步。
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5.12.2.3.3 检查PCR仪样品槽的荧光污染
检查PCR仪样品槽的荧光污染每月进行一次,如有需要随时进行。
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a)开启PE 5700型核酸扩增荧光检测仪电源。
b)从Start菜单选择运行PE 5700 SDS管理软件。
c)从样品槽中移去反应板。
d)将PE 5700光源检测器向前拖动盖住样品槽,并旋紧。
e)设定积分时间为256ms;打开卤素灯和光闸。
f)点击LIVE按钮获取图像,然后在任何地方点击停止。
g)观察96孔中背景荧光。如孔有显著荧光则表示该孔存在荧光污染。
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h)按照样品槽的清洁程序清洗样品槽。
5.12.2.3.4 更换卤素灯
仪器使用大约2000小时后应更换卤素灯,但具体要视卤素灯实际情况而定。
a)关闭PE 5700型核酸扩增荧光检测仪,冷却15分钟。
b)移去PE 5700光源检测器顶盖。
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c)移去卤素灯顶盖。
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d)把旧灯泡从插座中滑出,更换新卤素灯。确信灯正确安装在位置上。滑动灯泡时要轻轻抬起灯以避开装配螺丝钉。
e)重新装上灯顶盖和PE 5700光源检测器顶盖。
f)开启PE 5700型核酸扩增荧光检测仪电源,运行PE 5700 SDS管理软件。
g)通过软件控制卤素灯开关,确认灯随开关开闭。
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h)开启光闸,确认光闸可打开。
i)设定积分时间为1024ms,点击LIVE。保证可以采集一幅数据图像。
j)若新卤素灯不工作,PE 5700电源保险管可能有问题。
5.12.3 校准
PE 5700型核酸扩增荧光检测仪为复杂精密仪器,其校准工作需由专业工程师进行。实验室应与仪器厂家达成协议,定期(一般每年一次)校准仪器。
平时通过对室内质控图的分析,发现实验结果出现系统误差后,又经过分析排除了试剂和人员误差,应怀疑是否仪器出现了检测偏差从而需要校准。
实验室人员根据上述“光路系统的维护”部分的内容调节光路,可初步确定仪器是否光路原因引起的检测偏差,通过光路调节解决问题。若问题不出在光路系统,则应联系仪器厂家派技术人员来进行校准。
注意事项:
a)仪器应放置在水平坚固的平台上,外界电源系统电压要匹配,并要求有良好的接地线。
b)环境温度保持在
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c)仪器应每月底清洁维护。
d)仪器使用时应严格遵守上述使用步骤。
6. 期间核查
(1)PE-5700基因扩增仪的定标不需要特别的周期间隔,本实验室PE-5700基因扩增仪执行卫生部临床检验中心的指定校准。
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(2) 校准物均为与ICSH之标准相符合的校准物,测定值偏差均不超过其规定值。
7 . 相关记录
仪器使用登记表
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仪器设备维护和校准记录表
仪器设备检定周期表
仪器设备维修申请表
仪器报废(停用)单
仪器设备使用授权表
仪器设备档案卡
仪器设备领(借)用登记表
仪 器 设 备 总 表
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