免疫细胞化学(immunocytochemistry, ICC) 是利用抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定细胞内抗原的成分(主要是多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及定量的研究。 对抗原和抗体的要求 *具...[阅读全文]

当用纯化抗原进行选择时，评价所选择抗体的最佳方法是在高通量滴定模式下进行酶联免疫吸附试验(ELISA)。虽然这也许与抗体最终使用无关，但它提供了一个起始的筛选实验方案，能够让续后的分析集中在有希望的抗体上。大多数噬菌粒展示载体的设计容许进行两种EL...[阅读全文]

1．酶标直接法和间接法 Nakane(1966)将辣根过氧化物酶(HRP) 标记在抗体免疫球蛋白分子上，创建了酶标记免疫组化的直接法、间接法和桥法。 2．PAP法 Stemberger(1969)在酶桥法的基础上，建立了非标记抗体法，先将HRP免疫兔、羊或鼠，制成抗HRP抗体，再与HRP结...[阅读全文]

在两种或两种以上荧光素之间，如果荧光发射峰很近，那么荧光光谱彼此会有部分重叠，检测时可能出现一种荧光素的信号扩散到另一荧光通道的情况。这种现象称为串色或荧光光谱交叉(crosstalk)。避免或排除光谱交叉干扰的方法通常有以下几种： (1)使用几种荧光素...[阅读全文]

在一般的概念里，ELISA技术的可操作性强，不需复杂设备，甚至完全手工加样、洗板和肉眼判读结果，便可完成该技术的操作。随着人们对质量控制意识的加强，尽可能做到最低限度的减少系统误差，以及减少劳动强度等观念的不断改进，解决ELISA技术中加样、温育、...[阅读全文]

器材和试剂 洗涤缓冲液 结合缓冲液 辣根过氧化物酶(HRP)连接的抗M13单克隆抗体(mAb) (Amersham Biosciences) HRP底物㈠OPD(邻苯二胺，o-phe-nylenediamine) (Sigma)或ATBS 【2，2-连氮基-双-(3-乙基苯并噻吡咯啉-6-磺 酸)，2，2-azinobis(3-ethylbenzothiazo...[阅读全文]

DNA序列分析是从噬菌体展示的蛋白质或多肽文库中，鉴定出优化的变异体的首选方法。在DNA水平或翻译后(氨基酸序列)水平进行序列比对都是很有用的。 1 测序的时机 在当代全自动DNA测序仪的帮助下，很多克隆的全序列(可读框)都可以在大约几小时内得到。我们通常...[阅读全文]

ELISA操作步骤复杂，操作不当将引起较大的误差。以下叙述各个步骤中的影响因素。 1.加样 加样器是一种比较精密的工具，其在长时间使用时会因机械磨损或者推动杆内附着血痂等原因造成加样不准，尤其是对于样本量较大的临床实验室，因此必须定期对加液器进行维...[阅读全文]

辛酸提取法该法可用于分离提取人、兔、小鼠血清中的Ig及杂交瘤诱生的腹水和培养上清液中McAb。 【材料和试剂】 （1）正辛酸。 （2）60mmol/L，pH4.0醋酸缓冲液，PBS。 （3）透析袋。 （4）高速低温离心机。 【操作步骤】 （1）将待提取样品用60mmol/L，pH4.0...[阅读全文]

抗体是机体在抗原刺激下所产生的特异性球蛋白，所以又称为免疫球蛋白(Ig)。特异性抗体是免疫应答中的重要产物，因此亦是免疫学实验中常用的试剂，对于抗原的分析鉴定和定量检测极为重要，在各种免疫学诊断和治疗中应用极为广泛。 传统的方法制备的抗体是用...[阅读全文]