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设置生化分析仪的参数(3)

时间:2010-06-17 03:25|来源:实验室前沿| 分享|点击:


7. 延迟时间    
  在酶促反应一开始的阶段,由于各种因素的影响,酶促反应速率比较慢,可以是几秒到几分钟,尤其是双底物反应或需要辅酶参与者,通常为1-3min。而一般单试剂法只需30s,常用项目中丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、肌酸激酶需要特别注意。 sysqy.com


8. 监测时间  
  酶促反应延滞期后,在过量底物的存在下,反应速率加快并达到一个反应速率稳定的阶段,即酶促反应以恒定的速率进行,不受底物浓度的影响,这段时间称为线性反应期或零级反应期,自动化生化分析仪的监测时间即为此期。测酶的连续监测法至少90-120s或至少4点(3个ΔA),少于3个ΔA不能称为连续监测法,因为不能计算线性度。监测时间过长则容易发生底物耗尽,可测范围变窄。

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9. 试剂吸光度上限、下限
  试剂吸光度上限为正向反应用,可参考试剂盒说明书数值折算成所用比色杯的光径。如试剂盒要求上限为0.4,比色杯光径0.8cm,则试剂吸光度上限设置为0.32。
  试剂吸光度下限为负向反应用,设置法同试剂吸光度上限。
  超过限额表示试剂已变质,应更换合格试剂。 实验室前沿,了解实验室动态

10.底物耗尽限额
  不同型号分析仪的设计不一样,有的为零点与监测第一点吸光度的差额,有的为吸光度上升或下降至指定吸光度的数值。超过限额说明样品的酶活性非常高,底物消耗太快,在仪器程序规定的线性反应期内吸光度的变化往往不代表真正的酶活力,导致结果偏低,样品应稀释5-10倍后重测。 sysqy.com


11.线性度
  线性度是指“线性错误”或“线性误差”,其计算公式为:(A1-A2)/A3 × 100%,式中:A1为前2/3读数时间的斜率,A2为后2/3读数时间的斜率,A3为总的斜率。线性百分数大,说明ΔA之间已不成线性,超过限额说明底物不足,检测结果会变低,应稀释后重测。 本文来自实验室前沿

12.试剂空白速率
  试剂空白速率为试剂在监测过程中底物自动降解得到的结果。其值为以水代样品测得的项目结果,样本测定结果应扣除试剂空白速率。

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13.线性范围
  按试剂的质量而设置,超过范围应增加样品量或稀释后重测。不同试剂公司的试剂质量不一样,不同样品试剂比的线性范围也不一样,应实测试剂盒的线性范围。终点法可配制系列不同浓度的标准液,按分析项目的波长、样品量、试剂量、孵育时间,测定各浓度的吸光度,绘制标准曲线,在线性内的最高浓度为线性上限。 copyright sysqy.com

14.计算因子F值(或系数K)
14.1 理论F值  
  用连续监测法进行酶活性测定时,不需作标准管或标准曲线,根据摩尔消光系数很容易进行酶活性浓度的计算。先测定在线性范围内每分钟吸光度的变化(ΔA/min),以U/L代表酶活性浓度时,则可按下式进行计算:
U/L=ΔA/min=ΔA/min×V×106/(ε×v×1)
式中V:反应体系体积(ml);ε:摩尔吸光系数(cm2/mol);v:样品量(ml);l:比色杯光径(cm);ΔA:吸光度变化;106:将mol换算成μmol。

Tags:如何设置分析仪,生化分析仪,教你设置
责任编辑:丁军

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