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设置生化分析仪的参数(2)

时间:2010-06-17 03:25|来源:实验室前沿| 分享|点击:


3.波长
3.1 单波长  
  当测定体系中含有一种组分或在混合溶液中待测组分的吸收峰与其他共存物质的吸收波长无重叠时,可选用。如果一个物质有几个吸收峰,可选用吸光度最大的一个波长,或者选择在吸收峰处吸光度随波长变化较少的某个波长。
3.2 双波长  
  当被检溶液混浊或存在较多的干扰物质时,测定时会出现光散射和非特异性光吸收,从而影响测定结果的准确性,此时可用双波长测定,以提高测定结果的准确性,而在实际应用中选择辅助波长主要用于消除脂血、溶血、黄疸的干扰。由于脂质、血红蛋白、胆红素在较宽的波长范围内有较强的光吸收,常常同测定波长有重叠,此时测得的吸光度包含待测物质的吸光度和干扰物质的吸光度,因此选用合适的辅助波长可以消除干扰物质的吸光度。辅助波长的设置原则是根据测定波长选择辅助波长,要求干扰物质在测定波长同辅助波长有相同的吸光度。 内容来自实验室前沿网站

4. 样品量和试剂量
  样品和试剂量的设置原则一般是根据试剂说明书上的比例,并结合仪器的特性进行设置。仪器的特性包括:样品和试剂的最小加样量及加量范围、最小反应液的体积等。在实际工作中为节约成本可以根据比例缩小样品和试剂用量,但同时必须满足最小反应液总量。但值得注意的是,样品量不应少于3μl,否则测试结果的重复性差。

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5. 稀释水量
  添加样品稀释水的目的是为了洗出粘附在采样针内壁上的微量血清,减少加样误差,添加试剂稀释水的为了避免试剂间交叉污染,两种稀释水的量应在复溶试剂时按比例扣除。如用液体试剂盒时因不再加水,无法扣除稀释水量,所以两种稀释水的量应尽量减少,以免试剂被过量稀释。

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6. 孵育时间  
  在终点分析法中,孵育时间的选择应充分考虑到干扰问题。在白蛋白溴甲酚绿法中,血清中α1-球蛋白、转铁蛋白、触珠蛋白等亦可与溴甲酚绿呈色,但其反应速率较白蛋白为慢,而实际上,当血清与白蛋白混合时,“慢反应”已经发生,因此在溴甲酚绿与血清混合后30s读吸光度可明显减少非特异性结合反应。在葡萄糖氧化酶法中,葡萄糖氧化酶高特异性催化β-D-葡萄糖,而血清中葡萄糖α和β构型各占36%和64%,要使葡萄糖完全反应,必须延长孵育时间使α-葡萄糖变旋为β构型。此外,总胆固醇、甘油三酯都采用酶法的Trinder反应进行测定,但该反应37℃反应较慢,必须测定这些酶试剂反应达到终点的时间,自动分析仪用试剂盒一般可以在全部加样后5min内反应完全,所以应该选择分析仪的最大反应时间。

Tags:如何设置分析仪,生化分析仪,教你设置
责任编辑:丁军

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